永生化兔皮肤成纤维细胞系的建立

田欢; 张彩艳; 赵多维; 杨素杰; 郭晓晨; 赵祥杰; 宋军

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.06.21

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (6) : 1354 -1361. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.06.21

永生化兔皮肤成纤维细胞系的建立

田欢, 张彩艳, 赵多维, 杨素杰, 郭晓晨, 赵祥杰, 宋军

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摘要

采用酶消化法联合组织块贴壁培养法从新西兰大白兔耳组织分离的原代兔皮肤成纤维细胞，并通过慢病毒感染法分别导入人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)、SV40大T抗原(SV40 large T antigen, SV40LT)基因，经连续传代培养，通过CCK-8、EdU检测细胞增殖能力，免疫荧光染色鉴定波形蛋白(vimentin)表达，qPCR分析传代中hTERT、SV40LT基因表达情况，并检测细胞核型稳定性等评估细胞的永生化程度。qPCR结果显示，hTERT和SV40LT已成功转入兔成纤维细胞，并在传代过程中稳定表达；传至30代的永生化兔成纤维细胞维持典型成纤维细胞形态及Vimentin表达；CCK8和EdU结果显示，细胞增殖活性良好；衰老相关β-半乳糖苷酶染色(β-gal)呈阴性；核型分析显示，hTERT组、SV40LT组具有稳定的核型，染色体数目为44,与兔正常二倍体一致(2N=44)。结果表明，成功构建永生化兔皮肤成纤维细胞系(rabbit immortalized fibroblast-T1,RIF-T1)和(rabbit immortalized fibroblast-T2,RIF-T2),其可作为基因编辑及药物筛选的理想体外模型。