基于非洲猪瘟病毒pp62蛋白的间接ELISA方法的建立及应用

摘要

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV) pp62蛋白是疫苗研发的重要候选蛋白与血清学诊断靶标。本研究以大肠杆菌表达系统制备的ASFV pp62蛋白为包被抗原，表达pp62蛋白的重组狂犬病病毒rSRV9-ΔG-CP530R免疫小鼠的阳性血清和ASFV猪阳性血清为一抗，HRP标记的SPA为二抗，建立了检测ASFV抗体的间接ELISA方法。结果表明，当ASFV猪阳性血清稀释至1∶1 600、小鼠阳性血清稀释至1∶16 000时，该方法检测结果仍显示为阳性，敏感性高；且仅对ASFV阳性血清检测呈阳性反应，对猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2(PCV-2)阳性血清均呈阴性，特异性良好；该方法批间和批内变异系数均低于10%,重复性好；与商品化试剂盒检测同一批样品符合率达96.43%(54/56)。本研究建立的基于ASFV pp62蛋白的间接ELISA抗体检测方法，为ASF的临床诊断、疫苗开发与免疫效果评价提供了技术支持。

关键词

非洲猪瘟病毒 / pp62蛋白 / 抗体检测 / 间接ELISA

基金资助

“十四五”国家重点研发计划青年科学家资助项目(2021YFF0703600); 吉林省科技厅资助项目(20250601001RC)