猪源抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的表达与活性鉴定

文英会; 李洪炫; 马世杰; 赵丽; 方忠意; 宋志超; 陈红英

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.07.02

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (7) : 1459 -1465. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.07.02

猪源抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的表达与活性鉴定

文英会, 李洪炫, 马世杰, 赵丽, 方忠意, 宋志超, 陈红英

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摘要

为了研发猪源猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)单克隆抗体(mAb),以生物素标记的PEDV粒子作为诱饵抗原，运用流式细胞术从PEDV免疫过的猪外周血单核细胞中获取单个B细胞，使用巢式PCR扩增IgG重链/轻链可变区序列，并将其分别克隆到携带猪IgG恒定区序列的CH/CL-pcDNA3.4载体中，转染至HEK293F细胞中，表达猪源mAbs,并利用间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)、Western blot以及病毒中和试验评估mAbs的生物学活性。结果显示，分选出36个双阳性(抗原和抗体均阳性)单个B细胞，并成功配对13对重链/轻链序列。获得的13株mAb中，经间接ELISA检测有12株mAb对PEDV粒子具有结合活性；IFA显示PEDV感染的Vero细胞中有4株mAbs呈现特异性荧光，Western blot结果显示，有3株mAb出现特异性条带，中和试验结果显示，上述mAbs均无中和活性。本研究为PEDV结构分析和诊断试剂的研发提供了技术支撑。