一种基于ORF095蛋白检测牛结节性皮肤病病毒抗体的间接ELISA方法建立及应用

郭睿; 王怡; 周可磊; 贺春赛; 马元珍; 张斌

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.07.13

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (7) : 1544 -1550. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.07.13

一种基于ORF095蛋白检测牛结节性皮肤病病毒抗体的间接ELISA方法建立及应用

郭睿, 王怡, 周可磊, 贺春赛, 马元珍, 张斌

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摘要

以牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的ORF095重组蛋白作为包被抗原，建立了检测牛结节性皮肤病(LSD)抗体的间接ELISA方法。所建立方法的最佳条件为：抗原包被质量浓度0.5 mg/L(4℃过夜)、血清稀释比例1∶100、1%BSA封闭、37℃孵育2 h、酶标二抗稀释比例1∶8 000。特异性试验表明，该方法仅与LSDV和山羊痘病毒(GTPV)阳性血清反应，而与其他病毒阳性血清无交叉反应；敏感性分析显示，阳性血清稀释至1∶6 400时仍能检出；重复性试验中，组内和组间变异系数均小于10%,表明该方法稳定可靠。利用该方法检测四川省2023-2024年采集的1 863份牦牛血清，LSDV抗体阳性率为0%～9.76%。本研究建立的ELISA方法具有较高的特异性、敏感性和重复性，可用于LSD的血清学监测和流行病学调查，为LSD的防控提供技术支持。