稳定表达非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p17的HEK293T细胞系的构建及鉴定

摘要

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)编码p17蛋白的D117L基因是早期快速检测ASFV感染的重要靶标。为探究p17蛋白的功能，本研究应用生物信息学软件对p17的序列保守性及生物学特性进行分析，利用慢病毒表达系统构建稳定表达p17的HEK293T细胞系(HEK293T-p17),并通过Western blot、激光共聚焦显微镜、流式细胞术和细胞膜分离试验，鉴定了p17的表达与定位；同时，利用qPCR和共聚焦显微镜确定了ASFV在HEK293T-p17细胞中的复制情况及HEK293T-p17细胞与ASFV阳性血清的反应能力。结果表明，在不同基因型及重组ASFV毒株中，p17蛋白高度保守，且含跨膜区。激光共聚焦显微镜结果证实，细胞膜表达的p17可特异性结合ASFV阳性血清，但其表达并未显著影响ASFV在HEK293T-p17细胞中的复制水平。本研究为进一步探讨ASFV p17蛋白及其抗体功能奠定了基础。

关键词

非洲猪瘟病毒 / HEK293T-p17稳定细胞系 / p17蛋白

基金资助

中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资助项目(1610302025009); 国家自然科学基金资助项目(32573396,32202774)