表达PDCoV-S蛋白的重组乳酸菌构建及免疫原性初步评价

摘要

为研发新型猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)乳酸菌口服活载体疫苗，本研究通过将PDCoV S基因插入pSIP4-pgsA’-EGFP表达载体，并电转化导入植物乳酸杆菌NC8菌株中，构建了1株表面展示PDCoV S蛋白的重组植物乳酸杆菌，并对重组菌株的培养时间与诱导剂浓度进行了优化，同时采用Western blot和间接免疫荧光法确定了重组蛋白在连续传代及不同环境条件下的表达稳定性。此外，通过小鼠口服免疫，试验评估该菌株的免疫原性，并结合中和试验等方法评价其免疫效果。结果表明，成功构建的稳定表达S蛋白的重组植物乳酸杆菌在酸性和高温环境下具有良好的耐受性，活菌数量未见显著变化；在不同浓度胆盐条件下，活菌数尽管有所下降，但维持一定水平的蛋白活性。动物试验显示，口服接种后小鼠体重持续稳定增长，未观察到明显毒性或不良反应，表明该重组菌株安全性良好。免疫学分析显示，该重组乳酸菌可有效诱导特异性中和抗体产生，并激活T、B细胞免疫应答，显著提高肠道组织中IL-4和IFN-γ等关键免疫因子的mRNA转录水平。综上，本研究成功构建了能够表面展示PDCoV S蛋白的重组乳酸菌，为后续PDCoV口服疫苗的研发提供了重要的试验依据。

关键词

猪德尔塔冠状病毒 / 重组乳酸菌 / 植物乳酸杆菌NC8 / 免疫评价

基金资助

国家重点研发计划资助项目(2023YFD1800302); 江苏省农业科技自主创新基金资助项目(CX(24)3071); 江苏省基础研究专项资金资助项目(BK20241180); 国家自然科学基金资助项目(32402904)