表达大别班达病毒 Gn 头部蛋白复制缺陷型重组狂犬病病毒的构建与鉴定

摘要

为构建兼具高免疫原性与安全性的大别班达病毒(Dabie bandavirus, DBV)候选疫苗，本研究以G基因缺失的复制缺陷型狂犬病病毒(RABV)为载体，成功拯救出可表达DBV Gn头部结构域蛋白(Gn head)的复制缺陷型重组病毒，命名为rSRV9-ΔG-GnH,并对其体外生物学特性进行系统鉴定。利用直接免疫荧光、间接免疫荧光、RT-PCR、Western blot、透射电子显微镜及激光共聚焦显微镜等技术，分析重组病毒的生物学特性和遗传稳定性。直接免疫荧光证实重组病毒成功拯救；间接免疫荧光和Western blot结果显示，重组病毒能在BSR-G细胞中有效表达Gn head蛋白；RT-PCR检测表明，重组病毒连续传代12代仍可稳定携带Gn head基因，显示出良好的遗传稳定性；透射电镜结果显示，RABV糖蛋白缺失与异源蛋白表达未对病毒装配和形态结构产生明显影响；激光共聚焦结果表明，rSRV9-ΔG-GnH即便不表达RABV G蛋白，仍可在宿主细胞内实现Gn head蛋白的有效表达，且该蛋白能够准确定位于细胞表面膜结构。本研究成功构建了携带DBV Gn head蛋白的复制缺陷型重组狂犬病病毒，为研发安全、高效的基因工程疫苗提供了新思路。

关键词

大别班达病毒 / Gn head蛋白 / 复制缺陷 / 重组RABV

基金资助

“十四五”国家重点研发计划资助项目(2025YFC2608400); 吉林省科技发展计划资助项目(20240101266JC)