基于猪链球菌chap基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

李峰; 井长华; 贾琪; 吕素芳; 魏凤; 王寒竹; 李书光; 任洪林

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.09.11

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (9) : 2048 -2052. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.09.11

基于猪链球菌chap基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

李峰, 井长华, 贾琪, 吕素芳, 魏凤, 王寒竹, 李书光, 任洪林

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摘要

针对链球菌chap基因序列设计特异性引物和探针，通过优化反应体系及扩增条件，建立一种猪链球菌的实时荧光PCR检测方法。结果显示，最适退火温度为55.5℃,最适引物浓度为10μmol/L,探针浓度为5μmol/L。以1×10⁷～1×10³拷贝/μL的标准品构建标准曲线的线性方程为y=-3.46x+48.566（R²=0.994）,扩增效率达94.528%,灵敏度最低可检测至100拷贝/μL。该方法仅对猪链球菌核酸呈阳性反应，与其他常见病原无交叉反应；不同浓度模板的变异率均低于5%,表明该方法具有良好的稳定性和重复性。在对59份临床样品的检测中，荧光定量PCR检测阳性率（88.14%）高于普通PCR检测阳性率（79.66%）,两者阳性符合率为90.38%,阴性符合率为58.33%,总符合率为91.53%。结果表明，成功建立了一种猪链球菌实时荧光定量PCR检测方法，可用于猪链球菌感染的早期诊断、流行病学监测及病原定量分析，对生猪养殖业生物安全及公共卫生防控具有实际应用价值。