N-乙酰半胱氨酸对旋毛虫HSP70重组蛋白致大鼠心肌细胞线粒体凋亡的抑制作用

张婷; 王姗姗; 范秀丽; 王涵; 张颖; 宋铭忻; 李成

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.09.14

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (9) : 2068 -2074. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.09.14

N-乙酰半胱氨酸对旋毛虫HSP70重组蛋白致大鼠心肌细胞线粒体凋亡的抑制作用

张婷, 王姗姗, 范秀丽, 王涵, 张颖, 宋铭忻, 李成

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摘要

旋毛虫热休克蛋白70(heat shock protein 70 of Trichinella spiralis,TsHSP70)已被证实可在体外诱导大鼠H9c2心肌细胞氧化应激，并通过线粒体途径激活Caspase级联反应，最终引发细胞内源性凋亡。N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)作为一种经典抗氧化剂，在多种细胞氧化应激损伤模型中展现出对线粒体凋亡的保护潜力，但其能否改善TsHSP70所致的心肌细胞损伤尚未可知。为探讨NAC对TsHSP70致大鼠H9c2心肌细胞线粒体凋亡的干预作用，使用活性氧(reactive oxygen species, ROS)抑制剂NAC预处理H9c2细胞3 h后，再与60 mg/L TsHSP70共同孵育12 h。随后采用DCFH-DA荧光探针标记技术检测细胞内ROS荧光强度，qPCR与Western blot方法分别检测线粒体凋亡调控蛋白(Bax与Bcl-2)的基因转录及蛋白表达水平。同时利用试剂盒检测细胞中凋亡关键蛋白Caspase-3活性及细胞活性，Western blot检测JNK蛋白及其磷酸化水平，并通过流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示，TsHSP70刺激后，H9c2细胞ROS水平升高，Bcl-2/Bax比值极显著降低，Caspase-3蛋白活性增强，细胞活性受到抑制，JNK蛋白磷酸化水平升高，细胞凋亡率极显著上升。与TsHSP70单独刺激组相比，NAC预处理抑制了细胞内ROS过度累积，Bcl-2/Bax比值极显著回升(P<0.001),Caspase-3蛋白活化受到抑制(P<0.001),细胞活性显著升高(P<0.01),JNK磷酸化水平显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著下调(P<0.01)。结果表明，NAC预处理可通过抑制线粒体凋亡通路，有效缓解TsHSP70诱导的H9c2心肌细胞凋亡。