circFoxO3通过靶向结合miR-153调控热应激诱导的肉牛肝细胞自噬

摘要

为阐明circFoxO3在热应激条件下对肉牛肝细胞自噬的调控作用。本研究分别采用RT-qPCR和Lyso-Tracker对不同热应激时间肉牛肝细胞中circFoxO3表达及自噬溶酶体进行检测，同时将构建的circFoxO3过表达质粒及siRNA转染至肝细胞，并经42℃热应激处理12 h收集细胞检测自噬水平；通过生物信息学预测circFoxO3潜在靶向的miRNA,并利用双荧光素酶报告系统验证其靶向关系。结果表明：circFoxO3随着热应激处理时间呈现先增加后下降的趋势，细胞自噬随热应激时间呈增加趋势；在热应激条件下，牛肝细胞中circFoxO3极显著下调P62、LC3表达(P<0.01),显著下调ULK1基因的表达(P<0.05),并抑制肝细胞自噬的发生；生物信息学预测及双荧光素酶报告实验证实circFoxO3和miR-153存在特异性结合位点，circFoxO3可竞争性结合miR-153,进而调控下游靶基因ULK1表达；miR-153 mimic可显著增加热应激条件下肝细胞自噬水平，并上调自噬相关基因ULK1的表达(P<0.01)。circFoxO3-WT(野生型)和circFoxO3-MUT(突变型)载体分别与miR-153 mimic共转染牛肝细胞后进行热应激处理，与circFoxO3-MUT共转染组相比，circFoxO3-WT共转组细胞发生自噬水平显著升高，表明circFoxO3可通过“分子海绵”作用吸附miR-153。综上所述，热应激激活肉牛肝细胞的自噬，circFoxO3能竞争性结合miR-153,解除其对ULK1的抑制作用，从而增强热应激诱导的肝细胞自噬，并缓解热应激导致的肝细胞损伤。

关键词

circFoxO3 / 热应激 / 肝细胞 / 自噬 / miR-153 / 肉牛

基金资助

贵州省农业农村厅基金资助项目（黔财农2025,2006）; 重庆现代农业技术体系基金资助项目（CQMAITS202513）