血清miR-513a-3p、miR-106a-5p与miR-767-5p在乳腺癌中的表达及其预后价值

摘要

背景与目的 乳腺癌预后差，缺乏稳定的分子标志物。本研究旨在探讨血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p在乳腺癌患者中的表达水平及其临床意义。 方法 纳入2019—2020年内蒙古自治区巴彦淖尔市医院收治的乳腺癌患者100例（乳腺癌组）及乳腺良性疾病患者113例（良性组）。采用qRT-PCR检测血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p水平，分析三者在两组患者间的表达差异，以及与乳腺癌病理特征及3年预后的关系。采用Kaplan-Meier方法评估生存情况，通过Cox回归分析确定预后因素。 结果 乳腺癌组患者血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p水平均明显高于良性组患者（均P0.05）。三者水平均与淋巴结转移、TNM分期有关，miR-513a-3p和miR-767-5p与乳腺癌患者肿瘤分化程度有关，miR-513a-3p和miR-106a-5p还与远处转移有关（均P0.05）。乳腺癌患者中，死亡组三者水平均明显高于生存组（均P0.05）；Kaplan-Meier分析显示，三者高表达患者3年生存率均明显低于各自的低表达患者（均P0.05）。Cox回归提示，miR-513a-3p（OR=1.160）、miR-106a-5p（OR=1.419）及miR-767-5p（OR=1.327）均为独立预后危险因素（均P0.05）。 结论 miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p在乳腺癌患者血清中高表达，且与病理特征及预后密切相关，具有作为潜在预后标志物和治疗靶点的价值。

Graphical abstract

关键词

乳腺肿瘤 / 微RNAs / 预后

乳腺癌是由乳腺上皮细胞增殖失控引起的病变，多发于外上象限乳房，发病率居女性恶性肿瘤首位，且全球半数以上的乳腺癌病例发生在发展中国家^[1-2]。乳腺癌的临床表现为肿块、乳头溢液、乳腺皮肤出现“橘皮征”或“酒窝征”等，易转移到肺、胸膜、肝脏等部位^[3]。随着治疗策略的不断完善，乳腺癌的预后有所提高，但在我国农村地区，预后改善并不明显^[4]。既往研究^[5]表明，微小RNA（miRNA）参与调控癌细胞增殖等过程，目前已发现许多miRNA与恶性肿瘤的发生发展紧密相关，且成为诊疗标志物。通过数据库检索，从多个与乳腺癌细胞增殖、凋亡等过程密切相关的miRNA中挑选除了miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p这三个基因，目前，虽有部分研究^[6-8]证实miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p能够调控乳腺癌细胞的增殖等过程，但尚且缺乏临床研究。鉴于此，本研究检测了乳腺癌患者血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p水平，分析三者水平与乳腺癌患者病理特征及预后的关系，为乳腺癌的治疗及预后评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取内蒙古自治区巴彦淖尔市医院2019—2020年收治100例女性乳腺癌患者为乳腺癌组，年龄（53.62±6.17）岁。纳入标准：(1) 确诊为乳腺癌^[9]；(2) 病历资料齐全；(3) 于本院接受手术或化疗等抗癌治疗；(4) 患者签署知情同意书。排除标准：(1) 不接受随访；(2) 入组前接受抗癌治疗；(3) 既往肿瘤史；(4) 妊娠/哺乳期；(5) 合并自身免疫性疾病；(6) 肝肾等器官功能严重受损。另选取同期113例女性乳腺良性疾病患者为良性组，其中35例为乳腺增生、42例为乳腺炎、36例为乳腺囊肿；年龄（54.05±6.29）岁。纳入标准：(1) 既往无肿瘤史；(2) 心、肝等器官功能正常。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p水平检测

患者均在手术/化疗开始之前采集肘静脉血3 mL，离心后取血清，进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR），仪器使用赛默飞QuantStudio5 PCR仪。Trizol试剂（赛默飞）提取血清总RNA后使用逆转录试剂盒（赛默飞）进行逆转录，以逆转录产物为模板进行扩增，程序：95 ℃ 1 min，94 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s，72 ℃ 15 s，40个循环。以U6为内源对照，2^-∆∆CT法计算miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p相对表达水平。

1.2.2 随访

出院后随访3年，随访终点为死亡或失访，记录死亡、失访时间。

1.3 统计学处理

SPSS 25.0处理数据。计数资料用例数（百分比）[n（%）]表示，采用{\chi }^{\mathrm{2}}检验。计量资料用（\overline{x}\pm s）表示，采用t检验。基于随访数据，采用Kaplan-Meier曲线分析血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p与乳腺癌预后的关系；乳腺癌预后的影响因素采用Cox回归分析。P0.05为差异有统计学意义。

2 结　果

2.1 良性组、乳腺癌组血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p水平比较

与良性组比较，乳腺癌组血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p水平均明显较高（均P0.05）（表1）。

2.2 血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p与乳腺癌病理参数的关系

低分化乳腺癌患者血清miR-513a-3p和miR-767-5p表达水平较中高分化患者高（均P0.05），发生淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的患者血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p表达水平较未发生淋巴结转移、TNM分期为I~Ⅱ期的患者高（P0.05）；远处转移的患者血清miR-513a-3p和miR-106a-5p表达水平较未发生远处转移的患者高（P0.05）。乳腺癌患者年龄、肿瘤直径、病理类型与三者表达水平均无明显关系（均P0.05）（表2）。

2.3 不同预后患者血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p水平比较

随访过程中，3例失访，随访率97.00%，将生存、死亡的患者分别归为生存组（n=65）和死亡组（n=32）。与生存组比较，死亡组血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p水平均明显较高（均P0.05）（表3）。

2.4 血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p与乳腺癌预后的关系

以100例患者血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p表达均值为临界值，分为高表达（临界值）及低表达（≤临界值）。生存分析显示，miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p低表达患者3年生存率均明显高于各自的高表达患者（80.43% vs. 51.85%，χ² =9.149，P=0.002；77.55% vs. 52.94%，χ²=9.201，P=0.002；76.60% vs. 54.72%，χ²=5.274，P=0.022）（图1）。

2.5 乳腺癌预后的Cox回归分析

以血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p为自变量分析乳腺癌预后的影响因素，结果显示，血清miR-513a-3p（OR=1.160，95% CI=1.060~1.269）、miR-106a-5p（OR=1.419，95% CI=1.111~1.813）和miR-767-5p（OR=1.327，95% CI=1.011~1.743）均为乳腺癌预后的独立危险因素（均P0.05）（表4）。

3 讨　论

乳腺癌的发生与多种因素有关，具体发病机制尚不明确^[10]。手术是乳腺癌的有效治疗手段，不能进行手术者可采用靶向治疗、放化疗及内分泌治疗，早期乳腺癌经手术治疗后预后较佳，晚期时癌细胞发生远处转移，导致身体多器官受到影响，治疗效果不佳，预后较差^[11]。分析乳腺癌血清具有重要的临床意义。

作为非编码RNA，miRNA调控着多种基因的表达，参与人类各类疾病的发生发展。研究报道，miR-513a-3p影响着胃癌、肺癌、卵巢癌等癌细胞的生长过程^[12]。Jiang等^[13]发现，miR-513a-3p在鼻咽癌细胞中高表达，且hsa_circ_0000345通过海绵miR-513a-3p抑制鼻咽癌的发生进展。杨林青等^[14]报道，miR-513a-3p有可能通过靶向细胞色素P450家族成员1B1抑制对索拉非尼耐药的肝癌细胞的增殖，促进其凋亡，从而逆转其耐药性，可见miR-513a-3p对耐药肝癌细胞的治疗提供了新方向。本研究结果显示，与良性组相比，乳腺癌组血清miR-513a-3p水平明显较高，提示miR-513a-3p可能参与乳腺癌的发生过程。Fan等^[6]表明，环状RNA NR3C2通过海绵化miR-513a-3p使E3泛素蛋白连接酶对三阴性乳腺癌细胞的抑制作用增强。结合Fan等^[6]的推测，miR-513a-3p可能通过充当其他RNA的海绵调控下游基因表达，从而促进乳腺癌细胞增殖。本研究发现，miR-513a-3p表达水平与乳腺癌分化程度、淋巴结转移和远处转移有关，提示miR-513a-3p与乳腺癌病理特征密切相关。受杨林青等^[14]研究的启发，笔者后续将进行动物及细胞实验，深入分析miR-513a-3p的具体作用机制，为乳腺癌的治疗提供帮助。李红云等^[15]报道，miR-513a-3p水平有望成为评估的胃癌预后的潜在指标。本研究进一步分析发现，与生存组比较，死亡组血清miR-513a-3p明显较高，Cox回归也提示miR-513a-3p是乳腺癌预后的危险因素，且Kaplan-Meier分析表明，miR-513a-3p高表达者3年生存率低于低表达者，推测miR-513a-3p高表达抑制乳腺癌细胞凋亡，促进其迁移，从而对患者预后造成不利影响^[6]。

研究显示，miR-106a-5p不仅在炎症反应及氧化应激中发挥调控作用，在癌细胞的迁移、凋亡过程及耐药性等方面也发挥重要作用，人miR-106a-5p编码基因位于染色体Xq26.2^[16]。王科等^[17]的研究发现，miR-106a-5p在喉癌组织中的表达低于癌旁组织，而且miR-106a-5p低表达能够促进喉癌细胞上皮间质转化能力、减弱自然杀伤细胞对癌细胞杀伤力。然而，Zheng等^[18]研究表明，miR-106a-5p在卵巢癌组织及细胞中高表达，且miR-106a-5p通过调控Kruppel样因子6等下游蛋白表达促进癌细胞迁移。本研究结果中，乳腺癌组血清miR-106a-5p明显高于良性组，推测miR-106a-5p与乳腺癌的发生有关。Zhang等^[7]的研究中发现，miR-106a-5p通过靶向信号转导和转录激活因子3（STAT3）调控乳腺癌细胞铁死亡。李双健等^[19]研究发现，下调miR-106a-5p表达能够减弱乳腺癌细胞增殖能力，且该基因3'-末端2'-O-甲基化能够进一步促进其促癌作用。结合上述研究^[7,19]推测，miR-106a-5p可能通过调控STAT3表达介导乳腺癌细胞增殖及铁死亡影响乳腺癌发生。本研究对不同病理特征患者血清miR-106a-5p表达进行比较发现，miR-106a-5p表达高低与是否发生淋巴结、远处转移及TNM分期相关，可见miR-106a-5p与乳腺癌进展紧密相关，miR-106a-5p有望成为乳腺癌治疗靶点。本研究还发现，死亡组血清miR-106a-5p水平明显高于生存组，Cox回归也表明患者血清miR-106a-5p水平越高，3年内死亡风险越高。此外，Kaplan-Meier分析也提示，miR-106a-5p高表达者3年生存率低于低表达者，推测miR-106a-5p低表达抑制乳腺癌细胞增殖力、促进铁死亡，对生存率提高具有积极意义。

研究^[20]显示，miR-767-5p在多种肿瘤中表达异常，miR-767-5p通过调控靶基因表达影响疾病进展。Lin等^[21]报道，miR-767-5p在结直肠癌组织及细胞中表达下调。目前，miR-767-5p在乳腺癌中发挥的促癌作用是明确的，刘海英等^[22]发现，抑制miR-767-5p表达后，乳腺癌细胞侵袭、迁移、上皮间充质转化受到抑制，可能与miR-767-5p对胰岛素样生长因子1的调控有关。miRNA是瓦氏效应的关键调节因子，Wang等^[23]发现，miR-767-5p可能通过影响癌细胞的瓦氏效应影响其生长。本研究结果显示，乳腺癌组血清miR-767-5p明显较良性组高，与前人研究结果一致。本研究还显示，低分化、淋巴结转移者血清miR-767-5p明显较高，可见miR-767-5p水平与乳腺癌病理特征有关，miR-767-5p可能通过正向调控胰岛素样生长因子1促进癌细胞迁移及淋巴结转移。本研究进一步分析miR-767-5p与患者预后的关系，结果发现，死亡组血清miR-767-5p水平明显高于生存组，Cox回归也提示，血清miR-767-5p水平越高，预后可能越差，Kaplan-Meier分析显示，miR-767-5p高表达者3年生存率明显较低表达者低，结合前人研究推测，miR-767-5p可能通过影响乳腺癌细胞的瓦氏效应、上皮间充质转化等重要过程影响患者预后。

综上所述，在乳腺癌患者血清miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p水平较高，且三者水平与患者病理特征及预后密切相关。miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p有望成为乳腺癌治疗靶点，检测三者水平也有利于对患者预后进行预测，后续将通过细胞或动物实验探究miR-513a-3p、miR-106a-5p和miR-767-5p在乳腺癌中的具体作用机制。

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