斯钙素2、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白类似蛋白1表达与宫颈癌患者临床特征及预后的关系

Association of STC2 and SPARCL1 expression with clinical features and prognosis in patients with cervical cancer

摘要

目的 分析宫颈癌组织中斯钙素2（STC2）、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白类似蛋白1（SPARCL1）表达与患者临床特征及预后的关系。 方法 选取2021年1月—2023年7月徐州市妇幼保健院收治的90例宫颈癌患者，将其分为观察组（癌组织）和对照组（癌旁正常组织），对比不同组织中STC2、SPARCL1表达情况，分析不同临床特征宫颈癌患者STC2、SPARCL1表达状况及STC2和SPARCL1阳性表达的影响因素，分析不同STC2、SPARCL1表达对宫颈癌患者生存状况的预测价值。 结果 观察组STC2阳性率高于对照组，SPARCL1阳性率低于对照组（P <0.05）。浸润深度>1/2纤维肌层、分化程度低和TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期患者STC2阳性率高（P <0.05）。分化程度低，TNM分期Ⅲ、Ⅳ期，有淋巴结转移患者的SPARCL1阳性率低（P <0.05）。多因素一般Logistic回归分析，结果显示：浸润深度>1/2纤维肌层［O^R=3.095（95% CI：1.147，8.349）］、分化程度低［O^R=3.020（95% CI：1.122，8.129）］和TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期［O^R=4.694（95% CI：1.696，12.992）］均为宫颈癌患者STC2阳性的危险因素（P <0.05）。多因素一般Logistic回归分析，结果显示：有淋巴结转移［O^R=0.211（95% CI：0.084，0.530）］、分化程度低［O^R=0.146（95% CI：0.056，0.375）］和TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期［O^R=0.187（95% CI：0.072，0.486）］均为宫颈癌患者SPARCL1阳性的保护因素（P <0.05）。不同STC2、SPARCL1高低表达患者生存曲线比较，差异均无统计学意义（P >0.05）。 结论 宫颈癌组织STC2、SPARCL1表达与临床特征及预后密切相关。

Abstract

Objective To analyze the relationship between the expression of stanniocalcin 2 (STC2) and secreted protein, acidic and rich in cysteine-like 1 (SPARCL1) in cervical cancer tissues and clinical characteristics and prognosis in patients with cervical cancer. Methods A total of 90 patients with cervical cancer admitted to Xuzhou Maternal and Child Health Hospital from January 2021 to July 2023 were selected and divided into the observation group (cancer tissues) and the control group (adjacent normal tissues). The expression of STC2 and SPARCL1 in different tissues was compared. The expression of STC2 and SPARCL1 in cervical cancer patients with different clinical characteristics and the factors affecting the positive expression of STC2 and SPARCL1 were analyzed. The predictive value of STC2 and SPARCL1 expression levels for patient survival was explored. Results The positive rate of STC2 in the observation group was higher than that in the control group (P < 0.05), while the positive rate of SPARCL1 was lower than that in the control group (P < 0.05). Patients withdepth of stromal invasion > 1/2, poor tumor differentiation, or TNM stage III-IV had a higher STC2 positivity rate (P < 0.05). Patients with poor tumor differentiation, TNM stage III-IV, or lymph node metastasis exhibited a higher SPARCL1 positivity rate (P < 0.05). Multivariable logistic regression analysis revealed that depth of stromal invasion > 1/2 [O^R = 3.095 (95% CI: 1.147, 8.349) ], poor tumor differentiation [O^R = 3.020 (95% CI: 1.122, 8.129) ] and TNM stage Ⅲ~Ⅳ [O^R = 4.694 (95% CI: 1.696, 12.992) ] were all risk factors for STC2 positivity in patients with cervical cancer (P < 0.05), and that lymph node metastasis [O^R = 4.048 (95% CI: 1.624, 10.087) ], poor tumor differentiation [O^R = 3.254 (95% CI: 1.259, 8.413) ], and TNM stage Ⅲ~Ⅳ [O^R = 3.474 (95% CI: 1.241, 9.725) ] were all risk factors for SPARCL1 positivity in patients with cervical cancer (P < 0.05). Comparison of survival curves between patients with high and low STC2 or SPARCL1 expression showed no statistically significant differences (P > 0.05). Conclusion STC2 and SPARCL1 expression in cervical cancer tissues is closely associated with clinical features and prognosis.

Graphical abstract

关键词

宫颈癌 / 斯钙素2 / 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白类似蛋白1 / 临床特征 / 预后

Key words

cervical cancer / stanniocalcin 2 / secreted protein, acidic and rich in cysteine-like 1 / clinical features / prognosis

2018年全球宫颈癌新发病例约56.9万例，死亡约31万例^[1]。该病早期通常症状不典型，随着病情进展，患者可能出现阴道出血、接触性出血等，甚至对周围组织、器官产生侵犯，影响患者的生命健康^[2]。手术和放化疗是目前主要的治疗方法，但其侵袭性和转移性是引起患者死亡的主要因素。故早期预警并提示疾病预后的标志物尤为重要。

近年来，随着分子生物学技术的不断发展，宫颈癌的发病机制研究取得了显著进展。有研究表明，肿瘤微环境在宫颈癌的发生、发展及转移过程中起到了关键作用^[3]。斯钙素2（stanniocalcin 2, STC2）是一种分泌型糖蛋白激素，主要功能是调节体内的钙磷平衡，广泛存在于多种组织中^[4-5]。有研究表明，STC2参与浆液性卵巢癌患者的发生、发展，但其在宫颈癌中的作用尚未得到证实^[6]。富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白类似蛋白1（secreted protein, acidic and rich in cysteine-like 1, SPARCL1）是一种可以分泌到细胞外基质的功能蛋白，其在多种恶性肿瘤中具有抑制癌症的作用^[7]。

基于此，本研究采取回顾性分析，通过检测宫颈癌组织样本中STC2、SPARCL1，分析其与患者临床病理特征的关系，并进一步探讨STC2、SPARCL1表达对宫颈癌患者预后的影响。

1 资料与方法

1.1　临床资料

选取2021年1月—2023年7月徐州市妇幼保健院收治的90例宫颈癌患者，将其分为观察组（癌组织）和对照组（癌旁正常组织）。纳入标准：①符合宫颈癌的诊断标准^[8]，且经手术病理证实；②年龄19～78岁，临床资料完整；③首次确诊，术前未行放化疗等其他抗肿瘤治疗。排除标准：①合并生殖系统重大疾病史；②自身免疫性疾病及其他恶性肿瘤；③术后未经病理组织学确诊；④生存期<3个月；⑤患有精神疾病或意识障碍，无法有效沟通。本研究经医院医学伦理委员会批准（No：XZFY2024-050K-01J）。

1.2　方法

1.2.1　临床资料收集

包括年龄、肿瘤直径、病理分型、分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移。

1.2.2　STC2、SPARCL1表达

将肿瘤组织样本用4%多聚甲醛固定72 h后行石蜡包埋，制成蜡块保存。取蜡块切成4 μm厚的连续切片，经过二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化、磷酸盐缓冲液清洗、抗原修复和山羊血清封闭处理。滴加一抗免抗人STC2（武汉三鹰生物技术有限公司，10314-1-AP）、SPARCL1抗体（武汉三鹰生物技术有限公司，13517-1-AP），4 ℃下孵育过夜，用磷酸盐缓冲液清洗3次，再加入HRP标记的二抗，室温下孵育，磷酸盐缓冲液洗2次后，用二氨基联苯胺进行显色，苏木精复染，脱水并用中性树胶封片，显微镜下观察结果。由2名病理科人员根据SP法试剂盒说明书进行操作和解读结果，如有差异则进行协商确认。

判定结果：STC定位于细胞膜或细胞质，阳性表现为棕黄或黄褐色颗粒，染色强度根据无、浅黄色、棕黄色、棕褐色评为0～3分；随机选取10个高倍视野（400倍），计算阳性细胞的百分比：<1%（0分）、1%～10%（1分）、>10%～50%（2分）、>50%～80%（3分）、>80%（4分）。SPARCL1的评分依据着色强度和面积计算，着色强度为强（3分）、中（2分）、弱（1分）、无（0分），视野面积为>75%（4分）、50%～75%（3分）、25%～<50%（2分）、<25%（1分）；将2种评分方法的得分相乘，得到最终总分。表达状况分为高表达（5～12分）、低表达（1～4分）及不表达（0分），总分>4分视为阳性。

1.3　统计学方法

数据分析采用SPSS 24.0统计软件。计数资料以构成比或率（%）表示，比较用χ²检验；计量资料以均数±标准差（$\bar{x} \pm s$）表示，比较用t 检验；影响因素的分析用多因素一般Logistic回归模型；Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较用Log-rank χ²检验。P <0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1　不同组织中STC2、SPARCL1表达比较

观察组与对照组STC2、SPARCL1阳性率比较，经χ²检验，差异均有统计学意义（P <0.05）；观察组STC2阳性率高于对照组，SPARCL1阳性率低于对照组。见表1。

2.2　不同临床特征宫颈癌患者STC2、SPARCL1表达比较

不同浸润深度、分化程度、TNM分期患者的STC2阳性率比较，经χ²检验，差异均有统计学意义（P <0.05）；浸润深度>1/2纤维肌层、分化程度低和TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期患者STC2阳性率高。不同肿瘤直径、病理分型、淋巴结是否转移和年龄患者的STC2阳性率比较，经χ²检验，差异均无统计学意义（P >0.05）。不同分化程度、TNM分期、淋巴结是否转移患者的SPARCL1阳性率比较，经χ²检验，差异均有统计学意义（P <0.05）；分化程度低，TNM分期Ⅲ、Ⅳ期，有淋巴结转移患者的SPARCL1阳性率低。不同肿瘤直径、病理分型、浸润深度、年龄患者的SPARCL1阳性率比较，经χ²检验，差异均无统计学意义（P >0.05）。见表2。

2.3　宫颈癌患者STC2阳性表达的影响因素分析

以宫颈癌患者STC2表达是否阳性（否= 0，是= 1）为因变量，浸润深度（≤1/2纤维肌层= 0，>1/2纤维肌层= 1）、TNM分期（Ⅰ、Ⅱ期= 0，Ⅲ、Ⅳ期= 1）、分化程度（中/高= 0，低= 1）为自变量，进行多因素一般Logistic回归分析，结果显示：浸润深度>1/2纤维肌层[O^R = 3.095（95% CI：1.147，8.349）]、分化程度低[O^R = 3.020（95% CI：1.122，8.129）]和TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期[O^R = 4.694（95% CI：1.696，12.992）]均为宫颈癌患者STC2阳性的危险因素（P <0.05）。见表3。

2.4　宫颈癌患者SPARCL1阳性表达的影响因素分析

以宫颈癌患者SPARCL1表达是否阳性（否= 0，是= 1）为因变量，淋巴结转移（无= 0，有= 1）、TNM分期（Ⅰ、Ⅱ期= 0，Ⅲ、Ⅳ期= 1）、分化程度（中/高= 0，低= 1）为自变量，进行多因素一般Logistic回归分析，结果显示：有淋巴结转移[O^R = 0.211（95% CI：0.084，0.530）]、分化程度低[O^R = 0.146（95% CI：0.056，0.375）]和TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期[O^R = 0.187（95% CI：0.072，0.486）]均为宫颈癌患者SPARCL1阳性的保护因素（P <0.05）。见表4。

2.5　不同STC2、SPARCL1表达与宫颈癌患者生存状况的关系

随访1年，结合STC2、SPARCL1预测宫颈癌患者死亡的最佳截断值，将患者分为STC2高表达（46例）和低表达（44例），其中STC2高、低表达患者死亡分别有4和2例，不同STC2高低表达患者生存曲线比较，经Log-rank χ²检验，差异无统计学意义（χ²=0.680，P =0.410）。SPARCL1高表达（41例）和低表达（49例），其中SPARCL1高、低表达患者死亡分别有1和3例，不同SPARCL1高低表达患者生存曲线比较，经Log-rank χ²检验，差异无统计学意义（χ²=0.791，P =0.374）。见图1、2。

3 讨论

据调查，全球每年约有53万例新发和27万例死亡宫颈癌病例^[9]。随着宫颈癌筛查技术的普及和推广，早期发现和进行根治性手术对于改善患者预后具有至关重要的意义。但由于多种原因，如筛查意识不足、筛查技术不普及等，导致许多患者未能及时接受筛查，使病情发展至中晚期，降低患者生存状况^[10-12]。故早期发现和诊断对于宫颈癌患者的治疗及改善预后具有重要意义。

STC2最初由外国研究者在硬骨鱼类中发现，属于斯钙素糖蛋白分泌激素家族。既往研究发现，STC2在人体组织中广泛分布，并在多种生理功能中扮演着一定的角色^[13]。近年来，学者开始关注STC2与肿瘤之间的关系，证实STC2能够反映肿瘤的恶性程度，同时与肿瘤患者治疗过程中的耐药性存在相关性^[14]。研究指出，STC2在宫颈癌细胞中高表达，其高表达可促进宫颈癌细胞增殖^[15]。本研究结果中，宫颈癌患者癌组织STC2阳性率较癌旁组织高，且经多因素一般Logistic回归分析，浸润深度>1/2纤维肌层、分化程度为低、TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期为宫颈癌患者STC2阳性表达的相关因素。究其原因在于肿瘤浸润深度>1/2纤维肌层意味着癌细胞已经侵入宫颈组织的较深层部位，这种深度的浸润通常与肿瘤的侵袭性增强有关，可能导致更多的癌细胞进入血液循环，从而增加远处转移的风险^[16]。且浸润深度的增加可通过激活某些信号通路或改变肿瘤微环境，进而影响STC2表达。低分化程度的肿瘤通常意味着癌细胞的形态和功能与正常细胞差异较大，这些癌细胞往往具有更强的侵袭性和更高的增殖能力。低分化状态下的癌细胞可能会通过改变基因表达谱来适应恶劣的微环境，STC2基因可能在这种适应过程中被上调，以帮助癌细胞应对压力和促进其生存。TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期的宫颈癌患者通常意味着肿瘤已经发展到较晚期，具有较高的侵袭性和转移潜力^[17]。STC2阳性表达可能与肿瘤的侵袭性和转移能力密切相关，其可能通过影响肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移相关基因的表达，在癌症进展中发挥作用。

SPARCL1作为SPARC家族中的一种富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白，基因定位于人染色体4q22-25，此区域在多种癌症中表达缺失^[18]。SPARCL1在调节细胞间黏附、迁移和侵袭方面扮演关键角色，可通过调节肿瘤生长和分化参与肿瘤的发生、发展^[19]。文丽芳等^[20]研究表明，在多种恶性肿瘤组织中，SPARCL1的表达水平降低甚至缺失，一定程度上促进了肿瘤的侵袭和转移。本研究结果中，宫颈癌患者癌组织SPARCL1阳性率较癌旁组织低，且经多因素一般Logistic回归分析，有淋巴结转移、分化程度低、TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期为宫颈癌患者SPARCL1阳性表达的相关因素。发生淋巴结转移表明癌细胞已经从原发肿瘤部位扩散到周围的淋巴结，可能涉及多种分子机制。在淋巴结转移的过程中，SPARCL1的表达可能被下调，参与癌细胞的侵袭和转移。肿瘤的分化程度反映癌细胞的成熟程度和组织结构的有序性^[18,21-22]。低分化肿瘤细胞通常表现出更强的增殖能力和侵袭性，SPARCL1可能在这种环境中表达缺失，以支持细胞生存和适应。TNM分期是临床常用的肿瘤分期系统，其中Ⅲ、Ⅳ期代表肿瘤已经发展到较晚期，癌细胞可能已经侵入周围组织并可能远处转移。Ⅲ、Ⅳ期中，SPARCL1可能通过影响细胞外基质重构和肿瘤微环境改变，促进肿瘤进一步发展和转移^[23-24]。本研究存在一定局限性，如研究样本量较少，缺乏长期随访数据，难以全面评估这些基因表达与长期预后之间的关系，未来研究中，可增加样本量，延长随访时间，以验证本研究结果的可行性。

综上所述，宫颈癌组织STC2、SPARCL1表达与患者临床特征及预后密切相关。

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基金资助

江苏省卫生健康委员会医学科研项目(H2023113)