MicroRNA-410-3p、KLF6水平与溃疡性结肠炎患者临床特征及严重程度的关系

Correlation of microRNA-410-3p and KLF6 levels with clinical characteristics and disease severity in patients with ulcerative colitis

摘要

目的 分析microRNA-410-3p（miR-410-3p）、Krüppel样因子6（KLF6）水平与溃疡性结肠炎（UC）患者临床特征及严重程度的关系。 方法 回顾性分析2022年12月—2025年9月新疆维吾尔自治区中医院收治的128例UC患者，并根据疾病严重程度分为缓解期、轻度活动期、中度活动期和重度活动期。另取同期该院健康体检者90例为对照组。通过逆转录聚合酶链反应检测miR-410-3p相对表达量，酶联免疫吸附试验检测KLF6水平。比较UC组与对照组miR-410-3p相对表达量、KLF6水平，以及两者在不同临床特征、不同严重程度UC患者间的差异。 结果 UC组miR-410-3p相对表达量低于对照组，KLF6水平高于对照组（P <0.05）。随着病变范围扩大，患者miR-410-3p相对表达量逐渐降低，KLF6水平逐渐升高（P <0.05）。慢性持续型患者miR-410-3p相对表达量低于慢性复发型及初发型患者（P <0.05），初发型、慢性复发型、慢性持续型患者KLF6水平逐渐升高（P <0.05）。随着严重程度增加，患者miR-410-3p相对表达量逐渐降低（P <0.05）。 结论 血清miR-410-3p相对表达量下降、KLF6水平升高与UC活动度增加、病变范围扩大及慢性进展有关。

Abstract

Objective To analyze the relationship of the microRNA-410-3p (miR-410-3p) and Krüppel-like factor 6 (KLF6) levels with the clinical characteristics and severity of ulcerative colitis (UC). Methods A retrospective cohort study was conducted on 128 patients with UC admitted to Xinjiang Uygur Autonomous Region Hospital of Traditional Chinese Medicine between December 2022 and September 2025. Patients were categorized into four groups based on disease severity: remission group, mildly active group, moderately active group, and severely active group. Additionally, 90 healthy individuals undergoing routine health check-ups during the same period were selected as the control group. The relative expression of miR-410-3p was detected using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), while KLF6 levels were measured via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Comparisons were made between the UC group and the control group, as well as among UC patients with varying clinical characteristics and disease severity, regarding relative expression of miR-410-3p and KLF6 levels. Results The UC group exhibited lower relative expression of miR-410-3p and higher KLF6 levels than the control group (P < 0.05). As the lesion area expanded, the relative expression of miR-410-3p in patients gradually decreased (P < 0.05), while the level of KLF6 gradually increased. The relative expression of miR-410-3p in UC patients with the chronic persistent type was lower than that in patients with the chronic relapsing type and the initial onset type (P < 0.05), whereas the KLF6 level in patients with the initial onset type, chronic relapsing type, and chronic persistent type gradually increased (P < 0.05). With the increase in disease severity, the relative expression of miR-410-3p in patients gradually decreased (P < 0.05). Conclusion Decreased relative expression of serum miR-410-3p and elevated KLF6 levels correlate with increased UC activity, expanded lesion extent, and chronic disease progression.

关键词

溃疡性结肠炎 / miR-410-3p / Krüppel样因子6 / 临床特征 / 严重程度

Key words

ulcerative colitis / microRNA-410-3p / Krüppel-like factor 6 / clinical characteristics / disease severity

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）是一种可累及直肠至全结肠的慢性非特异性炎症性疾病^[1-2]。尽管普遍认为遗传、感染和饮食等因素是其潜在诱因，但UC的核心病因与确切发病机制至今仍未明确^[3-4]。MicroRNA（miRNA）是基因表达的重要调控因子，在多种病理过程中扮演着关键角色^[5]。经研究表明，microRNA-410-3p（miR-410-3p）可通过调节特定靶基因参与炎症和细胞生长^[6-7]。Krüppel样因子6（Krüppel-like factor 6, KLF6）作为转录调控因子，不仅影响细胞增殖、凋亡等重要生命活动，更在结直肠癌等消化道疾病中表现出显著的调控作用^[8-10]。目前，关于miR-410-3p与KLF6在UC中的表达模式及与患者临床特征、病情严重程度的关系缺乏系统性研究。为此，本研究通过检测不同临床特征及病情严重程度UC患者miR-410-3p相对表达量和KLF6水平，系统分析两者与UC发生、发展的关系。

1 资料与方法

1.1　一般资料

回顾性分析2022年12月—2025年9月新疆维吾尔自治区中医院收治的UC患者128例，年龄35～61岁，平均（48.25±6.13）岁；体质量指数（body mass index, BMI）13～30 kg/m²，平均（22.04±3.65）kg/m²。本研究严格依据改良Mayo评分系统进行分组。该评分系统包含4个项目：排便次数、便血程度、内镜下黏膜表现及医师总体评价，每个项目按严重程度分为0～3分。分组的核心依据为总分及单项评分：①缓解期（30例）：总分≤2分，且单项评分≤1分；②轻度活动期（35例）：总分3～5分；③中度活动期（38例）：总分6～10分；④重度活动期（25例）：总分11～12分^[11]。另取同期本院健康体检者90例为对照组，年龄35～61岁，平均（48.25±6.21）岁；BMI 14～31 kg/m²，平均（22.16±3.78）kg/m²。本研究经医院医学伦理委员会批准同意（2024XE0125-1）。

1.2　纳入与排除标准

1.2.1　纳入标准

①符合UC诊断标准^[11]；②临床资料完整；③年龄16～75岁；④凝血功能正常。

1.2.2　排除标准

①其他炎症性肠病；②妊娠期、哺乳期或近期计划妊娠女性；③伴有严重并发症（如肠狭窄、穿孔）；④合并严重基础疾病，如重要脏器功能不全、出血性疾病、哮喘、精神障碍等。

1.3　方法

1.3.1　临床资料

包括年龄、BMI、性别、病变范围、疾病类型。

1.3.2　逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）检测血清miR-410-3p的表达

采集UC患者及健康体检者空腹外周血4 mL，置于无菌采血管中。室温静置30 min，5 000 r/min离心，收集血清，分装于无菌EP管中，于-20 ℃条件下保存备用。使用TRIzol试剂提取血清总RNA，经核酸定量仪测定其浓度后，以DNase Ⅰ去除DNA污染，将RNA逆转录为cDNA。PCR反应体系总体积20 μL，反应条件：95 ℃预变性30 s；95 ℃变性5 s、63 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共40个循环。以U6作为内参基因，采用2^–ΔΔCt法计算miR-410-3p相对表达量，RT-PCR引物序列见表1。

1.3.3　酶联免疫吸附试验检测血清KLF6水平

按照人KLF6酶联免疫吸附试验试剂盒（上海科艾博生物技术有限公司，CB14760-Hu）说明书进行操作，建立标准曲线，然后使用酶标仪（北京悦昌行科技有限公司，SpectraMax iD5）测定吸光度，最后根据标准曲线计算KLF6水平。

1.4　统计学方法

数据分析采用SPSS 26.0统计软件。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，比较用t 检验或方差分析，进一步两两比较用LSD-t 检验。P <0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1　两组血清miR-410-3p相对表达量、KLF6水平比较

UC组与对照组miR-410-3p相对表达量、KLF6水平比较，经t 检验，差异均有统计学意义（P <0.05）；UC组miR-410-3p相对表达量低于对照组，KLF6水平高于对照组。见表2。

2.2　不同临床特征UC患者血清miR-410-3p相对表达量、KLF6水平比较

不同性别UC患者miR-410-3p相对表达量、KLF6水平比较，经t 检验，差异均无统计学意义（P >0.05）。不同病变范围、疾病类型UC患者miR-410-3p相对表达量比较，经方差分析，差异均有统计学意义（P <0.05）；不同病变范围、疾病类型患者间miR-410-3p相对表达量两两比较，差异均有统计学意义（P <0.05），即随着病变范围扩大，miR-410-3p相对表达量逐渐降低，慢性持续型患者miR-410-3p相对表达量低于慢性复发型及初发型UC患者。不同病变范围、疾病类型UC患者KLF6水平比较，经方差分析，差异均有统计学意义（P <0.05）；不同病变范围、疾病类型患者间KLF6水平两两比较，差异均有统计学意义（P <0.05），即随着病变范围扩大，KLF6水平逐渐升高，初发型、慢性复发型和慢性持续型患者KLF6水平逐渐升高。见表3。

2.3　不同严重程度UC患者血清miR-410-3p相对表达量、KLF6水平比较

不同严重程度UC患者miR-410-3p相对表达量、KLF6水平比较，经方差分析，差异均有统计学意义（P <0.05）。各组间miR-410-3p相对表达量、KLF6水平两两比较，差异均有统计学意义（P <0.05）；随着严重程度增加，miR-410-3p相对表达量逐渐降低，重度活动期患者miR-410-3p相对表达量低于缓解期、轻度和中度活动期患者；随着KLF6水平逐渐升高，重度活动期患者KLF6水平高于缓解期、轻度和中度活动期患者。见表4。

3 讨论

UC病程迁延，易反复发作，严重影响患者的生活质量^[12]。目前，UC的临床评估主要通过症状、内镜及病理检查，这些方法存在主观性强，或具有侵入性的缺点，在客观性与及时性方面存在局限^[13-15]。因此，探寻可用于辅助评估疾病严重程度及临床特征的血清学标志物，具有重要的临床意义。

本研究结果表明，UC患者血清miR-410-3p相对表达量显著下降，KLF6水平则明显上升，提示两者可能共同参与了UC的发生、发展。随着病变范围从E1扩大至E3、疾病的慢性化进展及疾病活动度加剧，miR-410-3p相对表达量逐级下降，而KLF6水平逐级升高，这一梯度变化直观地反映了肠道黏膜损伤的累积负荷，即越广泛的炎症病变带来的细胞应激信号越强烈。miR-410-3p在UC患者中低表达可能与其负调控的炎症信号通路功能受损有关，有研究表明该分子可通过靶向NF-κB等关键炎症通路发挥抑制作用^[16-17]。PERK/NF-κB通路的激活会刺激炎症因子释放并放大免疫反应，导致结肠黏膜损伤加重；而抑制其激活则被证实可缓解内质网应激，有助于维持肠黏膜屏障的完整性^[18-19]。多项研究表明，KLF6在炎症性疾病进展中发挥着关键作用^[20-21]。特别是在巨噬细胞中，KLF6是促炎基因表达的关键调节因子，可通过增强NF-κB信号传导促进炎症反应，同时抑制抗炎基因表达^[22-23]。在环境刺激下，KLF6可显著激活诱导型一氧化氮合酶表达通路，导致一氧化氮大量生成，进而引发级联放大效应，过度驱动炎症反应，造成组织严重损伤，促进疾病向更严重的阶段发展^[24]，这与先前研究结果一致^[25]。相较于当前临床常用的炎症标志物，miR-410-3p和KLF6在区分疾病严重程度方面展现出潜在优势。尽管血清C反应蛋白是评估全身炎症的经典指标，在感染、创伤等多种病理状态下均可升高，但其对UC的诊断特异性有限。粪便钙卫蛋白是评估肠道炎症的特异性指标，但其检测易受样本储存条件影响，且在感染性肠炎等疾病中也会升高，可能会对UC患者病情的精准判断产生干扰^[26]。相比之下，血清miR-410-3p、KLF6不仅与疾病严重程度和疾病范围关系密切，且血清样本更易于标准化采集和检测。这也提示两者可作为评估疾病严重程度和范围的潜在生物标志物。

综上所述，UC患者血清miR-410-3p相对表达量下降和KLF6水平升高，与UC活动度增加、病变范围扩大及慢性进展有关。其动态变化表明两者参与了UC的病理过程，可作为反映病情严重程度和临床特征的潜在指标，为疾病评估提供新视角，并为UC的临床治疗开发新靶点。

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基金资助

新疆维吾尔自治区自然科学基金面上项目(2022D01C810)