小窝蛋白-1对N-甲基-D天冬氨酸诱导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白带状闭合蛋白1的破坏作用研究

摘要

目的：探索小窝蛋白（Cav）-1对N-甲基-D天冬氨酸（NMDA）诱导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白带状闭合蛋白1(ZO-1)和血脑屏障完整性的破坏作用。方法：体外培养人脑微血管内皮细胞HBEC-5i并构建血脑屏障模型。以不同浓度的NMDA孵育HBEC-5i，并观察其对细胞活力的影响。细胞分别用NMDA受体（NMDAR)拮抗剂MK-801或Cav-1抑制剂Daidzein预处理后再用NMDA孵育。蛋白免疫印记（western blotting）法检测ZO-1、Cav-1及p-Cav-1蛋白的表达；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测ZO-1 mRNA的表达；跨膜细胞电阻仪Millicell ERS Volt-Ohm meter测量血脑屏障模型跨内皮细胞膜电阻（TEER）值。结果：与对照组比较，NMDA组p-Cav-1蛋白表达升高（P<0.05）,ZO-1蛋白和mRNA表达下降（P<0.01），同时TEER值下降（P<0.001）。与NMDA组比较，使用MK801拮抗NMDAR活化后ZO-1蛋白和mRNA水平上调（P<0.05）,TEER值增加（P<0.001）；用Daidzein抑制Cav-1活化可下调p-Cav-1蛋白表达（P<0.05），上调ZO-1蛋白和mRNA表达（P<0.05）以及增加TEER(P<0.001)。结论：NMDA可诱导HBEC-5i中紧密连接蛋白ZO-1的破坏，从而增加紧密连接屏障的通透性。抑制Cav-1的活化可阻断NMDA诱导的ZO-1表达下降和减少TEER。

关键词

人脑微血管内皮细胞 / N-甲基-D天冬氨酸 / 带状闭合蛋白1 / 小窝蛋白-1

基金资助

国家自然科学基金资助项目（No.82060236）; 广西自然科学基金资助项目(No.2019GXNSFDA245032)