胃癌外泌体MiR-221靶向PTEN促进肿瘤相关成纤维细胞的形成

摘要

目的：探究胃癌外泌体miR-221对肿瘤相关成纤维细胞的影响及机制。方法：提取并鉴定人胃黏膜细胞GES-1、人胃癌MGC-803、MKN45细胞分泌的外泌体（GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo）,qRT-PCR检测miR-221在GES-1、MGC-803、MKN45及其外泌体中的表达，将10μg/mL GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo以及等体积的PBS与人成纤维细胞（HKF）共孵育后，qRT-PCR检测HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达，ELISA检测细胞上清中IL-1β、IL-6的浓度。双荧光素酶报告基因实验检测miR-221与PTEN的靶向关系，将10μg/mL miR-NC exo和miR-221 exo与HKF共孵育，将miR-221 exo与HKF共孵育后转染PTEN质粒（miR-221 exo+PTEN），然后检测上述HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达以及细胞上清中IL-1β、IL-6的浓度。结果：本研究所提取的外泌体符合其结构和生物学特征，miR-221在MGC-803、MKN45和MGC-803 exo、MKN45 exo中高表达。与PBS组比较，MGC-803 exo组和MKN45 exo组HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达显著上调（均P<0.001），细胞上清中IL-1β和IL-6的浓度显著增加（均P<0.001），双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-221的靶基因。与miR-NC exo组比较，miR-221 exo组HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达显著上调（均P<0.001），细胞上清中IL-1β和IL-6的浓度显著增加（均P<0.001）；与miR-221 exo组比较，miR-221 exo+PTEN组HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达显著下调（均P<0.001），细胞上清中IL-1β和IL-6的浓度显著降低（P<0.001）。结论：胃癌外泌体miR-221抑制PTEN表达而促进肿瘤相关成纤维细胞的生成。

关键词

胃癌 / 外泌体 / miR-221 / 肿瘤相关成纤维细胞

基金资助

新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目（No.2019D01C100）