NOTCH2基因甲基化与幼年特发性关节炎的关系及其机制

摘要

目的：分析在抗重组全人源化肿瘤坏死因子α单克隆抗体（TNF）治疗停药前后对幼年特发性关节炎（JIA）患者NOTCH2基因甲基化的影响。方法：应用生物信息学分析抗TNF治疗前后JIA的基因组甲基化分布。采用甲基化特异性PCR(MSP)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别用于检测T0（抗TNF治疗前）和Tend（抗TNF治疗6周后）中NOTCH2基因的甲基化和表达情况。采用ELISA测定血中的细胞因子IL-8和IL-4浓度。收集T0组及Tend组外周血中CD4+T细胞，采用地西他宾和NOTCH2抑制剂处理后，采用MTT法分析了T0组和Tend组中CD4+T细胞的增殖和侵袭情况。免疫印迹法（WB）检测T0组及Tend组CD4+T细胞中NOTCH信号通路相关蛋白的表达情况。结果：与T0组相比，Tend组患儿NOTCH2基因高度甲基化，且其血中IL-8表达明显下降（P<0.05），该结果在体外细胞实验中也得到了验证。地西他宾处理后，T0组及Tend组与NOTCH信号通路相关的NICD和HES1的表达下调，且细胞因子IL-8明显升高和IL-4明显降低；而NOTCH通路抑制剂能够逆转此现象。结论：NOTCH2甲基化与抑制NOTCH信号通路与JIA缓解密切相关，对JIA治疗起抗炎作用。

关键词

幼年特发性关节炎 / DNA甲基化 / NOTCH2 / NOTCH信号通路