人肾上腺组织单细胞悬液制备方法的研究

摘要

目的：探讨人肾上腺组织单细胞悬液制备的最佳消化方法。方法：收集来自广西医科大学第二附属医院手术终止妊娠的16～18孕周胎儿肾上腺组织3例，分别使用3种消化方案（A方案：HBSS溶液中加入1 mg/mLⅠ型胶原酶，0.1 mg/mL DNaseⅠ；B方案：HBSS溶液中加入1 mg/mLⅡ型胶原酶，0.1 mg/mL DNaseⅠ；C方案：HBSS溶液中加入1 mg/mLⅣ型胶原酶，0.1 mg/mL DNaseⅠ）进行消化。采用显微镜计数得到单细胞总数和细胞存活率；通过mRNA测序获得不同消化方案的差异基因表达并对其功能进行分析；使用实时荧光定量PCR检测不同消化方案得到的细胞的标志基因相对表达量；使用流式细胞术检测CYP17A1+类固醇细胞和CHGA+嗜铬细胞的比例。结果：使用A方案和B方案消化得到的单细胞悬液结团少、形态完整、边界清楚、杂质及细胞碎片较少、背景较干净，而使用C方案得到的单细胞悬液有少量结团；使用B方案和C方案消化得到的细胞存活率差异均无统计学意义（均P>0.05）；类固醇细胞标志基因CYP11A1,CYP17A1,CYP11B1，类固醇调控基因SF-1,MC2R和成熟的嗜铬细胞标志基因CHGA的表达水平均在使用B方案消化时较高。结论：使用B方案消化是较优选的单细胞悬液制备方法。

关键词

肾上腺组织 / 单细胞悬液 / 酶消化法 / 差异表达基因 / 流式细胞术

基金资助

国家重点研究开发项目资助（No.2017YFC0908000）; 国家自然科学基金资助项目（No.81770759）; 广西基因组与个体化医学研究重点实验室资助项目（No.16-380-54,No.17-259-45,No.19-050-22,No.19-185-33,No.20-065-33）