LncRNA HOTAIR靶向miR-34a-5p调节类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的机制研究

摘要

目的：研究长链非编码RNA HOX转录反义RNA(LncRNA HOTAIR)对类风湿关节炎滑膜细胞（MH7A）凋亡的调控作用及其作用机制。方法：运用脂质体将pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-HOTAIR组（转染pcDNA-HOTAIR）、antagomiRNA组（转染antagomiRNA）、antagomiR-34a-5p组（转染antagomiR-34a-5p）、pcDNA-HOTAIR+agomiRNA组（共转染pcDNA-HOTAIR和agomiRNA）、pcDNA-HOTAIR+agomiR-34a-5p组（共转染pcDNA-HOTAIR和agomiR-34a-5p）转染进MH7A细胞。实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测细胞中HOTAIR、miR-34a-5p的表达；流式细胞术、蛋白免疫印迹（Western blotting）实验检测细胞凋亡率、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X基因（Bax）蛋白表达；双荧光素酶报告实验检测细胞荧光活性。结果：与HFLS组相比，MH7A组细胞HOTAIR表达升高；过表达HOTAIR后，MH7A细胞的凋亡率降低，凋亡促进蛋白Caspase-3、Bax表达降低，凋亡抑制蛋白Bcl-2蛋白表达升高，差异均有统计学意义（均P<0.05）；双荧光素酶报告实验显示，HOTAIR与miR-34a-5p之间存在靶向关系。抑制miR-34a-5p后，MH7A细胞具有与过表达HOTAIR相似的抑制细胞凋亡作用。过表达miR-34a-5p部分逆转过表达HOTAIR对MH7A细胞的凋亡抑制作用。结论：LncRNA HOTAIR在RA滑膜细胞中高表达，抑制RA滑膜细胞凋亡，其机制之一为靶向抑制miR-34a-5p。

关键词

类风湿关节炎滑膜细胞 / 长链非编码RNA HOTAIR / miR-34a-5p / 凋亡