鼻咽癌细胞体外诱导肿瘤相关成纤维细胞形成并上调NNMT表达

摘要

目的：探讨烟酰胺-N-甲基转移酶（NNMT）在肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）中的表达。方法：分别采用条件培养基（CM）和Transwell小室两种共培养模式建立CAFs体外诱导模型，将人胚肺成纤维细胞MRC-5与鼻咽癌细胞系5-8F共培养48 h，显微镜下观察细胞形态学变化。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测NNMT及CAFs相关标志物[α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、成纤维细胞活化蛋白（FAP）、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)及波形蛋白（Vimentin）]基因表达，CCK-8法检测细胞增殖能力。分离纯化头颈肿瘤来源CAFs,RT-qPCR和Western blotting法检测CAFs相关标志物及NNMT的表达。结果：两种共培养模式均能成功诱导并上调MRC-5细胞中NNMT、α-SMA、FAP、FSP-1、Vimentin基因表达（P<0.05），其中Transwell小室共培养模式诱导效果较好。鼻咽癌细胞系5-8F-CM亦能促进MRC-5细胞生长；头颈肿瘤来源的CAFs中FAP、FSP-1、Vimentin、IL-6、NNMT表达量均升高（均P<0.05）。结论：Transwell小室共培养模式是体外诱导CAFs形成的良好建模方式，NNMT在CAFs中的表达上调。

关键词

鼻咽癌 / 肿瘤相关成纤维细胞 / 共培养 / 烟酰胺-N-甲基转移酶 / 增殖