TERT沉默对OGD/R诱导的大鼠体外星形胶质细胞损伤的影响及机制

谢晓云, 吴双, 黄海萍, 梁程伟, 傅金凤, 王辞岚, 刘竞丽

doi:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.04.005

广西医科大学学报 ›› 2022, Vol. 39 ›› Issue (04) : 540 -546. DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.04.005

TERT沉默对OGD/R诱导的大鼠体外星形胶质细胞损伤的影响及机制

谢晓云, 吴双, 黄海萍, 梁程伟, 傅金凤, 王辞岚, 刘竞丽

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摘要

目的：探讨端粒酶逆转录酶（TERT）沉默对氧糖剥夺/复糖复氧（OGD/R）诱导的大鼠体外星形胶质细胞损伤的影响及机制。方法：体外原代培养新生大鼠脑皮层星形胶质细胞，建立星形胶质细胞OGD/R损伤模型。将细胞分为正常对照（Control）组、糖氧剥夺6 h/复糖复氧24 h(OGD/R)组、OGD/R+转染阴性对照（OGD/R+Si-Con）组及OGD/R+干扰TERT表达的SiRNA(OGD/R+Si-TERT)组。免疫荧光检测TERT及GFAP在星形胶质细胞的定位及表达变化。TERT-SiRNA转染后48 h收集细胞，通过Western blotting检测TERT的表达以验证转染效率。采用CCK-8法检测各组细胞的活力，Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况，Western blotting检测p53、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果：免疫荧光结果显示，TERT可表达于星形胶质细胞，以胞核为主，胞质表达较少。与OGD/R+Si-Con组比较，转染TERT-siRNA的星形胶质细胞中TERT表达降低（P<0.05），表明TERT-SiRNA转染星形胶质细胞成功；与Control组比较，OGD/R组、OGD/R+Si-Con组及OGD/R+Si-TERT组细胞活力及Bcl-2蛋白表达均降低，细胞凋亡率及TERT、P53和Bax蛋白表达均升高（均P<0.05）；与OGD/R+Si-Con组比较，OGD/R+SiTERT组细胞凋亡率及P53、Bax蛋白表达升高，细胞活力及TERT、Bcl-2蛋白表达降低（均P<0.05）。结论：TERT基因沉默促进OGD/R诱导的大鼠星形胶质细胞凋亡，其机制可能与激活P53/Bcl-2/Bax信号通路有关。