高灵敏液相色谱——质谱联用方法用于HIV-1感染细胞中胞苷修饰全分析

摘要

目的：建立同时检测DNA上4种胞苷修饰的高灵敏液相色谱—质谱联用（LC-MS）分析方法，并用于HIV-1病毒感染对细胞中胞苷修饰的全分析。方法：选择2-溴-1-4-二乙氨基苯基乙酮（BDEPE）作为标记试剂同时标记4种DNA胞苷修饰（5-mdC、5-hmdC、5-fdC和5-cadC），再结合LC-MS方法对HIV-1病毒感染前、后细胞中的目标修饰物进行准确定性和定量分析。比较HIV-1病毒感染细胞前、后胞苷各修饰含量的变化。结果：建立了化学标记结合LC-MS分析方法，标记反应转化率达90%以上，标记产物在反应后48 h内稳定。标记结合LC-MS分析提高胞苷修饰的检测灵敏度，5-mdC、5-fdC和5-cadC在HIV-1感染后显著升高（P<0.05）。结论：本研究建立了高灵敏度的胞苷修饰检测方法，并应用于HIV-1感染细胞DNA中的4种胞苷修饰的全分析，首次发现HIV-1病毒感染后5-mdC、5-fdC和5-cadC显著升高。

关键词

HIV-1 / 胞苷修饰 / 化学标记 / 液质联用