27nt-miRNA对过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响及分子机制

摘要

目的：探讨 27nt-miRNA 对经过氧化氢（H₂O₂）处理的血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡、活力和迁移的影响及作用机制。方法：将大鼠主动脉VSMCs分为5组：空白对照组、H₂O₂组、anti-27nt-miRNA+H₂O₂组、阴性对照+H₂O₂组和27nt-miRNA+H₂O₂组。空白对照组：不做任何处理；H₂O₂组：用500 μmol/L H₂O₂处理6 h诱导细胞凋亡；anti-27nt-miRNA+H₂O₂组：转染27nt-miR-NA 反义序列慢病毒载体后，用 500 μmol/L H₂O₂处理6 h诱导细胞凋亡；阴性对照+H₂O₂组：转染随机阴性序列慢病毒载体后，用500 μmol/L H₂O₂处理6 h诱导细胞凋亡；27nt-miRNA+H₂O₂组：转染27nt-miRNA高表达慢病毒载体后，再用500 μmol/L H₂O₂处理6 h诱导凋亡。使用细胞计数试剂盒（CCK-8）法和流式细胞术检测VSMCs存活率、凋亡率，划痕实验检测细胞迁移率，蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测 Bcl-2、Bax 蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较，H₂O₂组细胞活力和迁移率降低（P<0.05）、细胞凋亡率上升（P<0.05），提示成功构建VSMCs凋亡模型。对比阴性对照+H₂O₂组，27nt-miRNA+H₂O₂组可抑制细胞的活力和迁移能力（P<0.05），且细胞凋亡率上升（P<0.05），凋亡相关蛋白 Bax 表达水平上升，Bcl-2 表达水平下降（P<0.05），而 anti-27nt-miRNA+ H₂O₂组细胞凋亡率降低、细胞活力和迁移率增加，Bax蛋白表达水平降低，Bcl-2蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：过表达27nt-miRNA可促进H₂O₂所诱导的VSMCs凋亡和抑制其活力和迁移能力，其机制可能与凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达改变密切相关。

关键词

27nt-miRNA / 血管平滑肌细胞 / 凋亡 / 过氧化氢

基金资助

国家自然科学基金资助项目（No.82060655）; 南宁市良庆区科学研究与技术开发计划项目（No.201911）; 广西中医药适宜技术开发与推广项目资助（No.GZSY20-43）