流式细胞术监测免疫抑制后树鼩外周血淋巴细胞的动态变化

摘要

目的：探索建立一种适用于树鼩外周血淋巴细胞的流式细胞学方法，并利用该方法动态监测注射环孢素A（CsA）树鼩的淋巴细胞、CD4⁺细胞、CD19⁺细胞百分比的变化。方法：将18只成年树鼩随机分为空白组（10只）、CsA高剂量组（4只）和CsA低剂量组（4只）。CsA高、低剂量组分别经腹腔注射20 mg/kg和40 mg/kg的CsA，连续注射35 d。分别在第1天和第7天采集空白组树鼩的股静脉血，进行不同时间淋巴细胞及各亚群差异分析，以检验流式实验操作的稳定性。分别用PBS溶液和含1%牛血清白蛋白（BSA）的PBS溶液重悬外周血单细胞，台盼蓝染色法检测两种不同染色缓冲液对细胞存活率的影响。流式细胞术检测树鼩外周血淋巴细胞、CD3⁺细胞、CD4⁺细胞和CD19⁺细胞百分比，观察树鼩在注射低剂量和高剂量CsA后外周血淋巴细胞、CD4⁺及CD19⁺细胞的变化趋势。结果：采用含1%BSA的PBS作为染色缓冲液，可使流式细胞存活率保持在90%～100%，高于PBS（P<0.05）。通过不同操作时间的稳定性实验，筛选出适用于树鼩的CD4和CD19抗体；注射CsA后树鼩外周血淋巴细胞、CD4⁺和CD19⁺细胞百分率总体呈下降趋势。结论：本研究建立了一种应用流式细胞术检测树鼩外周血淋巴细胞的方法，为研究树鼩疾病模型的免疫学特性提供动态观察方法。

关键词

树鼩 / 流式细胞术 / 淋巴细胞