基于外源性脂联素探讨巨噬细胞移动抑制因子调控自噬在心肌缺血再灌注损伤的作用

摘要

目的：基于外源性脂联素（Apn）探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）在大鼠心肌缺血再灌注（MI/R）损伤后的作用及机制。方法：将50只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、心肌缺血再灌注组（MI/R组）、Apn预处理组（Apn组）、MIF组和Apn预处理+MIF组（Apn+MIF组），每组10只。除Sham组外，其余4组均建立MI/R模型，其中，Apn组和Apn+MIF组在缺血前15 min时腹腔注射重组Apn(5.0μg/g),MIF组和Apn+MIF组在再灌注120 min后腹腔注射rh-MIF(100 ng/kg)；处理结束后，检测各组大鼠心功能指标：射血分数（EF）、缩短分数（FS）、左心室收缩期内径（LVIDs）以及左心室舒张期内径（LVIDd）,ELISA法检测大鼠血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）含量，HE染色检测各组大鼠心肌组织病理学形态，实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测各组大鼠心肌组织内MIF表达；免疫荧光染色检测各组大鼠心肌组织内自噬标记物LC3B表达；Western blotting检测各组大鼠心肌组织内自噬相关蛋白表达。结果：与MI/R组比较，Apn组和MIF组大鼠FS和EF升高，LVIDs和LVIDd减小（P<0.05），血清CK-MB和LDH含量下降（P<0.05），心肌组织内细胞和纤维损伤减小。此外，MIF组大鼠心肌组织内MIF mRNA及其蛋白相对表达量均升高（P<0.05）,LC3B荧光染色强度减弱（P<0.05）,Beclin-1蛋白相对表达量下调，p62蛋白相对表达量上调，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下降（P<0.05）；与Apn组比较，Apn+MIF组大鼠FS和EF均进一步升高，LVIDs和LVIDd均减少（P<0.05），血清CK-MB和LDH含量下降（P<0.05），心肌组织损伤程度更小，大鼠心肌组织内MIF mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均升高（P<0.05），同时，LC3B荧光染色强度减弱（P<0.05）,Beclin-1蛋白相对表达量下调，p62蛋白相对表达量上调，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下降（P<0.05）。结论：基于Apn预处理对大鼠MI/R损伤的保护作用，再灌注后提高MIF能进一步抑制MI/R大鼠心肌组织内过度自噬并减少心肌组织损伤，对MI/R大鼠心功能起到保护作用。

关键词

心肌缺血再灌注 / 脂联素 / 巨噬细胞移动抑制因子 / 自噬