抗NMDAR脑炎小鼠血脑屏障破坏的实验性研究

摘要

目的：探讨抗N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）NR1亚基氨基末端结构域主动免疫诱导NMDAR脑炎对小鼠紧密连接（TJ）跨膜蛋白Occludin、带状闭合蛋白1（ZO-1）和血脑屏障（BBB）完整性的破坏作用。方法：将C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组，每组10只。模型组用NMDAR NR1受体区域的N356/G385氨基酸肽段主动免疫C57BL/6小鼠，建立抗NM-DAR脑炎小鼠模型,对照组注射不含肽段的等体积乳剂混合物，主动免疫6周。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清抗NMDAR IgG抗体，水迷宫和旷场实验评估小鼠记忆和焦虑行为，荧光素钠法测定BBB通透性，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测大脑皮质NMDAR NR1、Occludin、ZO-1 mRNA表达，western blotting法检测大脑皮质NMDAR NR1、基质金属蛋白酶9（MMP9）、Occludin、ZO-1和神经元特异性核蛋白（NeuN）蛋白表达。结果：与对照组比较，模型组小鼠血清中抗NM-DAR IgG抗体为阳性，并出现明显的记忆障碍和焦虑行为（均P<0.05）。模型组小鼠脑荧光素钠渗漏量明显增加（P<0.001），大脑皮质NMDAR NR1、Occludin和ZO-1 m RNA及蛋白表达量降低，MMP9蛋白表达量升高，NeuN蛋白表达量降低（均P<0.05）。结论：利用NMDAR NR1_356-385肽段主动免疫成功建立了抗NMDAR脑炎小鼠模型，产生抗NMDAR抗体，表达增加的MMP9可能破坏TJ蛋白从而使BBB功能障碍，导致大脑神经元损伤，并出现精神行为学改变。

关键词

抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎 / 紧密连接 / 血脑屏障 / 基质金属蛋白酶9

基金资助

国家自然科学基金资助项目（No.82060236）; 广西自然科学基金资助项目（No.2019GXNSFDA245032）