过表达LRRFIP1对肝癌细胞Huh7生物学行为的影响

摘要

目的：探讨LRRFIP1表达上调对肝癌细胞Huh7的生物学行为影响，并初步探索其相关机制。方法：构建LRRFIP1过表达的稳定细胞株，实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白免疫印迹法（western blotting）检测过表达效率，细胞增殖实验（CCK-8）检测过表达LRRFIP11对Huh7细胞增殖能力的影响；平板克隆形成实验检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞克隆形成能力的影响；流式细胞术检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞周期和凋亡的影响；划痕实验和Transwell实验检测过表达LRRFIP1对细胞迁移和侵袭能力的影响；检测与上皮间质转化（EMT）相关的蛋白E-cadherin、N-cadherin,Vimentin和Snail的表达；免疫共沉淀和蛋白质谱技术串联（CoIP-MS）法筛选可能与LRRFIP1互作蛋白。结果：过表达LRRFIP1促进了Huh7细胞的增殖（P<0.001）和克隆形成能力（P<0.001），抑制了细胞凋亡（P<0.01）；过表达LRRFIP1导致Huh7细胞G0/G1期比例减少，S期增加（P<0.001,P<0.01）。此外，过表达LRRFIP1组细胞的迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.001）数量显著低于对照组；western blotting实验结果显示，与对照组相比，过表达LRRFIP1组细胞上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达显著升高（P<0.001），间充质细胞标志蛋白N-cadherin和Vimentin表达显著减低（P<0.001,P<0.01）,EMT相关转录因子Snail蛋白表达显著降低（P<0.001）。最后，过表达LRRFIP1后我们采用CoIP-MS法筛选出80个可能与其互作蛋白，GO分析显示Huh7细胞株中下拉LRRFIP结合蛋白富集于27个生物过程、11个细胞组分和9种分子功能。KEGG通路注释显示这80种蛋白主要富集于ECM-受体相互作用信号通路；STRING和Cytoscape分析Hub基因。结论：LRRFIP1过表达促进了肝癌细胞Huh7的增殖和克隆形成能力，抑制其凋亡、迁移、侵袭能力；LRRFIP1可能与eEF1A1相互作用，从而影响肝癌的发生发展。

关键词

LRRFIP1 / 原发性肝癌 / Huh7 / 增殖 / 迁移 / CoIP-MS

基金资助

国家自然科学基金资助项目（No.82273103）; 广西自然科学基金面上项目资助（No.2017JJA140770y）