EGCG-exosomes通过miR-30a/Beclin-1轴抑制自噬减轻心肌缺血/再灌注损伤

摘要

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）预处理心肌细胞分泌的外泌体（exosomes）对心肌缺血/再灌注（I/R）损伤的作用及分子机制。方法：体外培养H9c2心肌细胞，给予或不给予EGCG预处理，建立缺氧/复氧模型。提取、纯化外泌体，采用在体基因干扰或基因敲除技术，构建antagomiR-30a和Beclin-1+/-小鼠，建立I/R模型，缺血30 min心肌注射外泌体，研究EGCG预处理心肌细胞分泌的exosomes(EGCG-exosomes)对I/R的作用。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a与Beclin-1的相互作用，TTC染色法检测心肌梗死面积，苏木精—伊红（HE）染色观察心肌细胞形态变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清心肌肌钙蛋I(cTnI)含量；透射电子显微镜观察自噬小体数量；实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）、蛋白印迹法（western blotting法）检测miR-30a与自噬相关基因和蛋白的表达。结果：与I/R组相比，exosomes组自噬体数量减少，心肌损伤减轻。与exosomes组相比，EGCG-exosomes组心肌梗死面积缩小，cTnI含量降低，自噬体数量减少，Beclin-1和LC3-Ⅱ基因及蛋白表达下调，cathepsin D蛋白表达下调，p62基因及蛋白表达上调；沉默miR-30a促进心肌I/R自噬发生，给予EGCGexosomes则逆转上述作用；此外，敲低Beclin-1与EGCG-exosomes有协同抑制自噬作用（均P<0.05）。结论：EGCG-exosomes通过miR-30a/Beclin-1轴抑制自噬，减轻心肌I/R损伤。

关键词

EGCG-exosomes / 缺血/再灌注损伤 / 自噬 / miR-30a/Beclin-1

基金资助

国家自然科学基金资助项目（No.82060659;No.81760726）; 广西自然科学基金资助项目（No.2018GXNSFAA050035）