抗VASN-EGFFN3重组蛋白的单克隆抗体的制备

莫婉灵; 李辉; 廖舟翔; 温莎; 黄雪静; 张起; 宋振宇; 杨丽超; 何敏

doi:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2023.04.025

广西医科大学学报 ›› 2023, Vol. 40 ›› Issue (04) : 690 -696. DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2023.04.025

抗VASN-EGFFN3重组蛋白的单克隆抗体的制备

莫婉灵, 李辉, 廖舟翔, 温莎, 黄雪静, 张起, 宋振宇, 杨丽超, 何敏

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摘要

目的：通过大肠杆菌表达系统表达和纯化VASN-EGFFN3重组蛋白，免疫小鼠制备抗VASN-EGFFN3单克隆抗体。方法：构建pET30a(+)-VASN-EGFFN3重组载体，以大肠杆菌BL21(DE3)为载体表达VASN-EGFFN3重组蛋白。用镍离子亲和层析柱纯化VASN-EGFFN3重组蛋白。利用纯化后的VASN-EGFFN3重组蛋白免疫BALB/c小鼠后，用杂交瘤技术制备抗VASN-EGFFN3单克隆抗体。结果：成功构建pET30a(+)-VASN-EGFFN3重组原核表达质粒，诱导的重组VASN-EGFFN3蛋白主要以包涵体的形式存在。纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的血清抗体效价达到1∶2 187 000，免疫效果良好。利用杂交瘤技术获得2株杂交瘤细胞株。结论：成功利用大肠杆菌表达系统制备并纯化VASN-EGFFN3重组蛋白，通过杂交瘤技术成功制备小鼠抗VASN-EGFFN3单抗。