线粒体内膜转位酶13调控肝星状细胞活化和增殖的实验研究

摘要

目的：研究线粒体内膜转位酶13(TIMM13)的表达对小鼠肝星状细胞活化和增殖的影响，探讨TIMM13在肝纤维化的的进展中的作用。方法：用5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL转化生长因子-β1(TGF-β1)作用小鼠肝星状细胞系JS-1细胞24 h，诱导JS-1细胞活化，实验分为对照组（0 ng/mL组）、5 ng/mL组、10 ng/mL组、20 ng/mL组；采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹（western blotting）法检测各组TIMM13、肝纤维化指标α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白（COL1A1）的mRNA与蛋白表达水平；在JS-1细胞中分别敲低和过表达TIMM13，将实验分为空载组（对照组）和沉默组/过表达组，用RTqPCR和western blotting法检测TIMM13、α-SMA和COL1A1的mRNA与蛋白表达水平，用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测沉默/过表达TIMM13的第0、第24、第48和第72小时细胞的增殖情况。结果：与对照组比较，5 ng/mL组、10 ng/mL组、20 ng/mL组中TIMM13的mRNA表达升高（均P<0.05）,5 ng/mL组、10 ng/mL组中TIMM13蛋白表达水平增高（均P<0.05）；沉默组中TIMM13、α-SMA和COL1A1的mRNA表达水平相对于对照组降低（均P<0.01）,TIMM13和α-SMA的蛋白表达水平降低（均P<0.01），在第48小时和第72小时JS-1细胞增殖能力被明显抑制（均P<0.05），而过表达组中TIMM13、α-SMA和COL1A1的mRNA表达水平升高（均P<0.05）,TIMM13和α-SMA的蛋白表达水平升高（均P<0.05），在第48小时和第72小时促进了JS-1细胞的增殖能力（均P<0.05）。结论：TIMM13的表达促进小鼠肝星状细胞的活化和增殖，进而促进了肝纤维化的发展。

关键词

线粒体内膜转位酶13 / 肝星状细胞 / 细胞活化 / 细胞增殖 / 肝纤维化