miR-125a-5p基因敲除C57BL/6J小鼠的构建

王辞岚, 李劲频, 傅金凤, 陈柳伶, 谭舒婷, 刘竞丽

doi:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2023.05.018

广西医科大学学报 ›› 2023, Vol. 40 ›› Issue (05) : 838 -842. DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2023.05.018

miR-125a-5p基因敲除C57BL/6J小鼠的构建

王辞岚, 李劲频, 傅金凤, 陈柳伶, 谭舒婷, 刘竞丽

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摘要

目的：构建miR-125a-5p基因敲除小鼠并进行基因鉴定，并探讨基因敲除小鼠体内miR-125a-5p对靶基因Foxp3的调控。方法：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，以C57BL/6J小鼠为背景，对miR-125a-5p基因位点进行基因敲除，培育纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠。采用裂解法提取鼠尾组织基因组DNA，进行PCR反应检测亲代纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠基因型，并选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠作为亲代种鼠进行配种繁殖。通过全自动蛋白表达分析系统检测小鼠脾脏组织Foxp3的蛋白表达。结果：成功构建miR-125a-5p基因敲除小鼠，琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物为240 bp或0 bp单条带的为纯合型基因敲除（KO）小鼠，鉴定获得668 bp或428 bp单条带的为野生型（WT）小鼠，与预期的目的基因片段分子量大小一致，成功鉴定了miR-125a-5p基因敲除小鼠的基因型。选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠进行配种繁育，获得了一批miR-125a-5p敲除纯合子基因型小鼠。与WT小鼠相比，miR-125a-5p基因敲除小鼠的脾脏组织中Foxp3表达降低（P<0.05）。结论：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠，miR-125a-5p基因的缺失参与靶基因Foxp3的表达调控，为进一步研究miR-125a-5p在自身免疫性疾病中的发生机制提供前期基础。