抑制EB病毒阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤增殖的抗TMD5单克隆抗体的筛选和效果评价

涂小云, 熊玉红, 邓爱花, 孙春枝, 刘阳, 陈宇

doi:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2023.09.007

广西医科大学学报 ›› 2023, Vol. 40 ›› Issue (09) : 1480 -1486. DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2023.09.007

抑制EB病毒阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤增殖的抗TMD5单克隆抗体的筛选和效果评价

涂小云, 熊玉红, 邓爱花, 孙春枝, 刘阳, 陈宇

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摘要

目的：筛选抗爱泼斯坦—巴尔病毒（EBV）潜伏期膜蛋白-1中跨膜结构域5(TMD5)单克隆抗体并评价其抑制EB病毒阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的效果。方法：人工合成TMD5肽段，用此TMD5肽段免疫BALB/c小鼠；PEG法制备杂交瘤；ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞；有限稀释法制备单克隆；使用阳性孔单克隆细胞免疫小鼠制备腹水；western blotting法和ELISA法分别对腹水中的单克隆抗体进行鉴定和效价测定；体外CCK-8法测定腹水对Sp2/0细胞存活能力的影响；Annexin VFITC/PI双标记流式细胞术测定腹水对Sp2/0细胞凋亡率的影响；在体内裸鼠荷瘤实验测定腹水对裸鼠荷瘤生长的影响。结果：成功备制13个杂交瘤，其中3个为阳性杂交瘤，分别为2B11、5D07和6F04，阳性率为23%。以5D07孔单克隆细胞制备的腹水以1∶105稀释后，阳性/阴性腹水单克隆抗体抗TMD5效价比为6.763，阳性/Sp2/0的效价比为5.952，效价最高。与PBS组相比，2B11组和5D07组DB细胞48 h和72 h增殖能力降低，凋亡率升高，裸鼠荷瘤较小（P<0.05）,6F04组上述测定指标无明显差异（P>0.05）。与2B11组相比，5D07组DB细胞48 h和72 h增殖能力降低，凋亡率升高，裸鼠荷瘤较小（P<0.05）。结论：通过杂交瘤法筛选出的5D07单克隆抗体抗TMD5效价高，在体外和在体裸鼠荷瘤实验抗EBV+DLBCL淋巴瘤活性良好。