LCMT1过表达对M2型巨噬细胞极化的影响

李菡, 蓝利, 王新航, 刘彧冰, 王名鸿, 袁江浪, 孔星星, 陆彩玲, 李习艺, 唐深

doi:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2023.12.001

广西医科大学学报 ›› 2023, Vol. 40 ›› Issue (12) : 1933 -1940. DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2023.12.001

LCMT1过表达对M2型巨噬细胞极化的影响

李菡, 蓝利, 王新航, 刘彧冰, 王名鸿, 袁江浪, 孔星星, 陆彩玲, 李习艺, 唐深

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摘要

目的：通过慢病毒载体构建亮氨酸羟基甲基转移酶1(LCMT1)过表达THP-1细胞株，探讨LCMT1对THP-1细胞和THP-1源性巨噬细胞M2型极化的调控作用。方法：利用慢病毒技术，构建LCMT1过表达载体。设置blank组、OE-control组和OE-LCMT1组。荧光显微镜观察各组细胞的绿色荧光，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测各组细胞增殖情况，实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测LCMT1 mRNA和蛋白表达水平以及PP2Ac甲基化相关蛋白表达水平。将THP-1细胞经100 nmol/L佛波酯（PMA）处理48 h后诱导分化为M0型巨噬细胞；M0型巨噬细胞经20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)刺激48 h，诱导分化为M2型巨噬细胞。实时荧光定量PCR检测M2型巨噬细胞极化标志物c型甘露糖受体1(MRC-1)、CC趋化因子配体22(CCL22)、树突状细胞特异性细胞间黏附分子结合非整合素（CD209）的mRNA表达。结果：与blank组相比，OE-control和OELCMT1组表达绿色荧光，OE-control组的增殖曲线下降（P<0.001）,LCMT1和PP2Ac甲基化相关蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）；与OE-control组相比，OE-LCMT1组增殖曲线下降（P<0.05）,LCMT1和PP2Ac甲基化蛋白表达升高（P<0.05）,PPME-1和PP2Ac去甲基化蛋白表达降低（P<0.01），总PP2Ac蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。与Blank M0组相比，Blank M2组的M2极化标志物MRC-1、CD209、CCL22 mRNA水平升高（P<0.05）；与OE-control M2组比较，OE-LCMT1M2组的M2极化标志物MRC-1、CD209、CCL22 m RNA水平降低（P<0.05）。结论：成功构建了LCMT1过表达的THP-1细胞株，LCMT1过表达可抑制THP-1细胞的增殖；维持总PP2Ac蛋白水平，增强PP2Ac甲基化并伴随PPME-1和PP2Ac去甲基化水平降低；下调M2型巨噬细胞极化标志物的表达，抑制M2型巨噬细胞极化。