UbcH5a调控DNA损伤修复蛋白表达对食管癌细胞放射敏感性的影响

摘要

目的：构建过表达人泛素交联酶UbcH5a基因的稳定转染食管鳞癌EC109细胞株，研究UbcH5a影响食管癌放射敏感性的机制。方法：将EC109细胞分为空白对照组（不处理）、阴性对照组（转染pEGFP-C1质粒）和过表达组（转染pEGFP-UbcH5a质粒）。分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和western blotting法检测UbcH5a mRNA及蛋白表达以验证转染效率，克隆形成实验检测2 Gy X线照射后的细胞存活分数（SF2），免疫荧光检测DNA损伤灶点，western blotting法检测DNA损伤修复相关蛋白（ATM、ATR、p-ATM、p-ATR、Chk1、Chk2和BRCA1）表达。结果：与空白对照组相比，过表达组UbcH5a mRNA及蛋白表达水平升高，SF2降低，DNA损伤灶点增多（均P<0.05），而阴性对照组无明显变化（P>0.05）。与阴性对照组相比，过表达组经X线照射前、后ATM、ATR、p-ATM、p-ATR、Chk1、Chk2和BRCA1表达均显著下调（均P<0.05）。结论：UbcH5a通过抑制DNA损伤修复相关蛋白表达来增强食管癌细胞的放射敏感性。

关键词

食管癌 / 泛素 / UbcH5a / 放射敏感性 / DNA损伤修复

基金资助

国家自然科学基金资助项目（No.82003238）; 武汉市卫生健康委医学科研项目（No.WX21Q02）