PD-L1介导淋巴细胞YAP磷酸化在病毒性急性肺损伤中的作用

摘要

目的：探讨程序性死亡受体配体1(PD-L1)介导淋巴细胞yes相关蛋白（YAP）磷酸化在病毒性急性肺损伤中的作用。方法：将SPF级C57BL/6J小鼠随机分为对照组、根据小鼠气管内滴注聚肌苷—聚胞苷酸（即Poly I:C）的时间分为4 h、8 h、1 d、3 d、7 d组，在这五组中选取炎症损伤最严重的组作为Poly I:C组；利用PD-1/PD-L1抑制剂BMS-1 10mg/kg腹腔注射预处理后气管内滴注Poly I:C，作为Poly I:C+BMS-1组。野生型小鼠Poly I:C组和PD-L1敲基因小鼠Poly I:C组处理同Poly I:C组；野生型小鼠对照组和PD-L1敲基因小鼠对照组腹腔注射麻醉后气管内给予等量生理盐水。相应时间点将小鼠安乐死收集标本。采用苏木精—伊红（HE）染色法评估小鼠肺组织损伤程度；通过检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白浓度、总细胞数以及酶联免疫吸附法（ELISA）检测BALF中肿瘤坏死因子（TNF）-α水平评估炎症情况；蛋白免疫印迹（western blotting, WB）检测程序性死亡受体1(PD-1)、PD-L1、YAP、p-YAP蛋白表达。结果：与对照组比较，8 h、1 d、3 d、7 d组肺组织病理学损伤评分及BALF总蛋白浓度显著升高，8 h、1 d、3 d组BALF中总细胞数明显增多，4 h、8 h、1 d、3 d组BALF中TNF-α水平显著上调，差异均有统计学意义（P<0.05）；其中1 d组小鼠肺组织病理学损伤评分、BALF中总蛋白浓度、BALF总细胞数以及BALF中TNF-α水平均高于4 h、8 h、3 d、7 d组。与对照组比较，1 d、3 d、7 d组小鼠肺组织中PD-1和PD-L1蛋白水平均明显升高（P<0.05）。Poly I:C组小鼠肺组织病理损伤评分和BALF中TNF-α水平明显高于对照组，与Poly I:C组相比，Poly I:C+BMS-1组小鼠肺组织病理损伤评分和BALF中TNF-α水平显著降低（P<0.05）。与对照组相比，Poly I:C组和Poly I:C+BMS-1组小鼠淋巴细胞中YAP蛋白表达明显下调，p-YAP蛋白表达显著上调（P<0.05）；与Poly I:C组相比，Poly I:C+BMS-1组小鼠淋巴细胞中YAP蛋白表达上升，p-YAP蛋白表达下降（P<0.05）。与对照组相比，Poly I:C组小鼠淋巴细胞中YAP蛋白表达明显下调而p-YAP蛋白表达显著上调，PD-L1基因敲除后Poly I:C组小鼠淋巴细胞中YAP蛋白表达有所上升而p-YAP蛋白表达明显下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：病毒性急性肺损伤小鼠肺组织中高表达PD-L1蛋白，PD-L1可能通过激活淋巴细胞的YAP磷酸化加重病毒性急性肺损伤。

关键词

程序性死亡配体 / yes相关蛋白 / 急性肺损伤 / 淋巴细胞

基金资助

国家自然科学基金资助项目（No.82060024）; 广西医学高层次骨干人才“139”计划（No.G202002015）; 广西麻醉学临床医学研究中心建设（No.桂科AD22035214）