高纯度RBP4抗体的制备及在水动力转染小鼠肝癌模型中的应用

摘要

目的：制备高纯度视黄醇结合蛋白4(RBP4)单克隆抗体并应用其检测高压水动力转染小鼠肝癌模型中RBP4的表达水平。方法：将RBP4重组蛋白表达菌株培养并诱导表达，使用AKTA系统纯化蛋白，通过杂交瘤的方式制备高纯度RBP4单克隆抗体；将7周龄SPF级C57BL/6J小鼠随机分为实验组和对照组，每组6只，雌雄各半，利用高压水动力转染法联合SB11转座子系统与CRISPR/Cas9系统构建实验组小鼠肝癌模型；将RBP4单克隆抗体应用于免疫组化法检测小鼠肝癌组织中RBP4的表达水平。结果：成功获得纯度95%以上的重组RBP4蛋白，制备RBP4单克隆抗体过程中杂交瘤细胞融合率60%，最终获得3株阳性单克隆细胞株，经纯化获得高效价（1∶243 000）、高纯度（96.77%）单克隆抗体。成功建立高压水动力转染小鼠肝癌模型，实验组肝癌发生率100%，肝脏呈现典型肝癌病理特征，对照未出现肝癌。利用制备的RBP4单克隆抗体进行免疫组化检测，发现实验组肝癌组织中RBP4表达水平显著低于对照组（P<0.001）。结论：本研究制备的RBP4单克隆抗体具有高效价和高纯度特点，RBP4蛋白表达水平在高压水动力转染小鼠肝癌组织中明显降低，RBP4与肝癌发生和发展的关系值得进一步研究。

关键词

视黄醇结合蛋白4 / 抗体 / 肝癌 / 水动力转染