白藜芦醇通过活化Sirt1/Nrf2通路抑制LPS诱导的HT-29细胞铁死亡

摘要

目的：探讨白藜芦醇(RSV)对溃疡性结肠炎(UC)铁死亡的调控作用及潜在机制。方法：本研究分为两部分，第一部分为RSV的网络药理学分析，通过采用蛋白质相互作用(PPI)分析以及GO、KEGG以及GVAS富集分析等方法，探究RSV、UC和铁死亡之间的内在联系，并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对筛选出来的共靶点基因在细胞层面进行验证。第二部分为细胞实验，采用10μg/mL的脂多糖(LPS)干预HT-29细胞24 h，建立UC的体外模型。在此基础上使用RSV(25μmol/L或50μmol/L)预处理6 h,并在RSV(50μmol/L)干预的基础上加用SIRT1抑制剂EX527(10μmol/L)预处理细胞4 h，将HT-29细胞分为对照组、LPS组、RSV低剂量组、RSV高剂量组以及EX527组。首先使用丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、总铁离子试剂盒、RT-qPCR、酶联免疫吸附实验(ELISA)以及蛋白质免疫印迹(western blotting)等检测技术检测RSV对氧化应激(MDA、GSH)、炎症因子(TNF-α、IL-6)、铁死亡相关指标(细胞总铁离子、GPX4、ACSL4)及通路因子(SIRT1、NRF2)表达的影响；然后使用western blotting技术检测EX527对细胞GPX4、ACSL4、Sirt1、Nrf2蛋白表达的影响。结果：网络药理学结果显示，RSV、铁死亡及UC在多个生物学水平上相互作用，且RSV促进SIRT1 mRNA的表达。细胞实验结果显示：与LPS组相比，RSV下调促氧化指标(MDA)、炎症因子(TNF-α、IL-6)、细胞总铁离子及铁死亡正调控因子(ACSL4)的 表达，而上调抗氧化指标(GSH)、铁死亡负调控因子(GPX4)和通路指标(SIRT1、NRF2)的表达；而与RSV高浓度组相比，EX527下调了通路(Sirt1、Nrf2)和铁死亡负调控因子(GPX4)的蛋白表达，而上调了铁死亡正调控因子(ACSL4)的蛋白表达。结论：RSV可以抑制HT-29细胞铁死亡和炎症反应，其机制可能与Sirt1/Nrf2通路的活化有关。

关键词

铁死亡 / 白藜芦醇 / 脂多糖 / 溃疡性结肠炎

基金资助

国家自然科学基金资助项目（No.81660093）