穿心莲ApbHLH80基因克隆及表达分析

摘要

目的：克隆穿心莲转录因子ApbHLH80基因，并对其进行生物信息学分析和表达分析。方法：根据穿心莲转录组数据库设计引物，采用PCR扩增等方法克隆ApbHLH80全长序列，使用生物信息学在线分析工具，分析和预测该基因编码蛋白的理化性质，采用实时荧光定量PCR分析该基因在茉莉酸甲酯处理下的表达模式，并采用高效液相色谱法测定穿心莲内酯含量。结果：生物信息学分析表明，该基因开放阅读框长度包含1 095 bp，共编码364个氨基酸；该基因的氨基酸序列分子量约为39.96 ku，理论等电点为5.73，无信号肽和无跨膜结构，属亲水性核蛋白；该蛋白与苏麻、丹参、一串红和芡欧鼠尾草等物种亲缘关系较为接近，都具有b HLH＿AtbHLH＿like保守结构域。实时荧光定量PCR分析结果表明，ApbHLH80的表达量在叶片中最高，并且响应茉莉酸甲酯的诱导，其表达模式与穿心莲内酯合成存在密切联系。结论：成功克隆得到的ApbHLH80基因可能参与调控穿心莲内酯合成，为进一步探讨其潜在的调控作用提供理论支撑。

关键词

穿心莲 / ApbHLH80基因 / 基因克隆 / 生物信息学 / 表达分析