胸腺瘤相关重症肌无力患者瘤旁胸腺上皮细胞外泌体对Treg细胞功能的影响

摘要

目的：探讨胸腺瘤相关重症肌无力（TAMG）患者瘤旁胸腺上皮细胞外泌体对调节T细胞（Treg）叉状头转录因子P3(FOXP3)表达及分泌转化生长因子（TGF）-β1、白细胞介素（IL）-10功能的影响。方法：收集TAMG患者及先天性心脏病无胸腺疾病的患者（对照组）胸腺组织，分离培养胸腺上皮细胞，使用广谱角蛋白（p-CK）和波形蛋白（Vimentin）染色行免疫荧光鉴定；膜亲和柱法提取胸腺上皮细胞外泌体并行透射电子显微镜（TEM）、粒径分析（NTA）及western blotting检测鉴定；磁珠分选法分离胸腺上皮细胞中Treg细胞，流式细胞术检测纯度；Treg细胞与外泌体共培养，行外泌体染色示踪实验，检测FOXP3表达及培养上清液TGF-β1、IL-10水平。结果：分离细胞呈长梭形，生长良好，免疫荧光p-CK呈阳性，Vimentin呈阴性，细胞为胸腺上皮细胞。TEM、NTA、western blotting结果提示提取物为外泌体。流式细胞术检测Treg细胞纯度>90%，纯度较好。外泌体染色示踪结果提示Treg细胞可吞噬胸腺上皮细胞外泌体，与TAMG组胸腺上皮细胞外泌体共培养后Treg细胞FOXP3表达减少（P<0.01）,TGF-β1、IL-10分泌减少（P<0.01）。结论：Treg细胞可吞噬TAMG瘤旁胸腺上皮细胞外泌体，导致FOXP3表达减少、分泌TGF-β1、IL-10减少，免疫抑制功能减弱，其可能参与TAMG的发病过程。

关键词

胸腺瘤相关重症肌无力 / 胸腺上皮细胞 / 外泌体 / 调节T细胞