杨桃根提取物DMDD对α-synuclein PFFs所致分化SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制研究

摘要

目的：探讨不同浓度杨桃根提取物DMDD对α-突触核蛋白预制原纤维（α-Syn PFFs）所致分化SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及作用机制。方法：使用不同浓度DMDD作用于视黄酸分化的SH-SY5Y细胞，通过MTS测定细胞活力，确定DMDD作用于分化SH-SY5Y细胞的低、中、高浓度；使用不同浓度的DMDD处理5μg/mL α-Syn PFFs诱导的细胞损伤模型，采用Hoechst 33342染色和一氧化氮试剂盒分别检测细胞核损伤细胞数与细胞内一氧化氮产生量；采用蛋白质印迹法检测细胞内酪氨酸羟化酶（TH）、多聚腺苷酸二磷酸（PAR）及多聚腺苷酸二磷酸核糖酶-1(PARP-1)蛋白表达水平；采用免疫荧光技术检测细胞内129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白（pS129-α-Syn）、磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)阳性细胞数及凋亡诱导因子（AIF）核易位细胞数。结果：Hoechst 33342染色结果显示，与α-Syn PFFs模型组比较，各浓度DMDD处理组出现细胞核损伤的细胞数明显减少（P<0.001）；一氧化氮检测结果显示，与α-Syn PFFs模型组比较，各浓度DMDD处理组细胞一氧化氮生成量显著降低（P<0.01或P<0.001）；蛋白质印迹法结果显示，与α-Syn PFFs模型组比较，高浓度DMDD处理组细胞TH蛋白表达水平明显升高（P<0.05），而中、高浓度DMDD处理组细胞PAR蛋白表达水平明显降低（P<0.05），高浓度DMDD处理组细胞PARP-1、Cleaved PARP-1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；免疫荧光结果显示，与α-Syn PFFs模型组比较，中、高浓度DMDD处理组pS129-α-Syn阳性细胞数明显减少（P<0.05或P<0.01），各浓度DMDD处理组γH2AX阳性细胞数明显减少（P<0.01或P<0.001）,AIF核易位细胞数也明显减少（P<0.01或P<0.001）。结论：DMDD可能通过抑制PARP-1/AIF通路介导的PARP-1依赖性死亡途径减轻α-Syn PFFs所致分化SH-SY5Y细胞损伤。

关键词

杨桃根 / DMDD / α-突触核蛋白预制原纤维 / PARP-1依赖性细胞死亡 / SH-SY5Y