利用CRISPR/Cas9在HEK293T细胞实现γ珠蛋白上调

摘要

目的：采用CRISPR/Cas9技术编辑HEK293T细胞的γ珠蛋白启动子上调γ珠蛋白，探索基因编辑技术治疗β地中海贫血方法的可行性。方法：采用CRISPR/Cas9基因编辑技术，在γ珠蛋白转录起始位点（TSS）区前420 bp设计2条sgRNA序列，通过脂质体转染CRISPR/Cas9质粒诱导HEK293T细胞血红蛋白γ(HBG)基因启动子切割，经阳性克隆筛选、Sanger测序验证、TIDE分析编辑效率、RT-qPCR和western blotting检测γ珠蛋白基因表达量。结果：2条sgRNA序列均能对γ珠蛋白进行基因切割且切割活性分别为44.20%(sgRNA1)、32.90%(sgRNA2),RT-qPCR和western blotting结果显示，与对照组（NCs组，转染空载PX459质粒）相比，sgRNA2组γ珠蛋白基因表达量升高（P<0.05）。结论：CRISPR/Cas9基因编辑技术可在γ珠蛋白启动子上实现有效编辑，从而上调γ珠蛋白。

关键词

CRISPR/Cas9编辑 / γ珠蛋白 / HEK293T细胞 / 基因编辑