铜绿假单胞菌诱导的中性粒细胞胞外诱捕网对树突状细胞的影响

摘要

目的：探讨铜绿假单胞菌（PAO1）诱导的中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）对树突状细胞（DCs）的调控作用。方法：体外分离人外周血中性粒细胞，分别以佛波酯（PMA）和PAO1菌株[感染复数（MOI）=1、10、100]诱导NETs形成，通过免疫荧光染色观察NETs形态，并利用PicoGreen荧光定量法测定NET-DNA浓度。将PAO1诱导的NETs与DCs共培养，采用流式细胞术检测DCs表面共刺激分子（CD40、CD86、CD80）的表达水平，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白介素-1β(IL-1β)、白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的转录及分泌水平。结果：PAO1诱导的NETs呈现核膨大及丝状连接结构，MOI=100组的NET-DNA浓度较MOI=1组显著增加（P<0.01），且NET-DNA释放量在1～3 h先升后降，4 h达峰值。PAO1诱导的NETs显著上调DCs表面共刺激分子CD40、CD86和CD80的表达（P<0.001），并促进IL-1β、IL-12和TNF-α的分泌（P<0.01）。结论：PAO1诱导的NETs能促进DCs的成熟及活化，并分泌促炎因子IL-1β、IL-12及TNF-α，这种促炎作用可能具有双重效应。

关键词

铜绿假单胞菌 / 中性粒细胞胞外诱捕网 / 树突状细胞 / 免疫调节 / 细胞因子