Hsa-miR-146b-3p靶向CREB3L3调控PI3K/Akt通路促进内皮细胞功能障碍及动脉粥样硬化进程

摘要

目的：研究hsa-miR-146b-3p对内皮细胞的影响及其在动脉粥样硬化中的潜在作用和机制。方法：通过慢病毒构建EA.hy926内皮细胞干预模型，将细胞分为4组，（1）过表达组：OE＿hsa-miR-146b-3p组和OE＿control组；（2）沉默组：SH＿hsa-miR-146b-3p组和SH＿control组。采用CCK-8实验检测细胞的增殖能力，细胞划痕及Transwell实验检测迁移能力，细胞周期和凋亡检测分别探讨细胞的分布特征和凋亡率；通过转录组测序（RNA-seq测序）和双荧光素酶实验验证hsa-miR-146b-3p的下游靶点；通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹实验（western blotting）检测靶基因的表达量。结果：与对照组比较，过表达hsa-miR-146b-3p显著促进EA.hy926细胞增殖（P<0.01）、迁移（P<0.000 1）及S期细胞比例（P<0.01），并升高晚期凋亡率和总凋亡率（P<0.05）；沉默组则呈现增殖抑制（P<0.05）、迁移能力减弱（P<0.000 1）并降低S期比例（P<0.05），同时减少早期凋亡率（P<0.05）。RNA-seq测序联合双荧光素酶实验证实hsa-miR-146b-3p调控PI3K/Akt通路上的CREB3L3(P<0.001)。RT-qPCR和western blotting结果显示，hsa-miR-146b-3p过表达导致CREB3L3表达水平下降。结论：Hsa-miR-146b-3p可能通过下调CREB3L3的表达水平及其所在的PI3K/Akt通路影响内皮细胞的功能并促进动脉粥样硬化的发生发展。

关键词

hsa-miR-146b-3p / 冠心病 / 转录组测序 / PI3K/Akt信号通路