雷洛昔芬抑制口腔鳞癌细胞的作用机制研究

摘要

目的：探讨雷洛昔芬（raloxifene,RAL）对口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）恶性表型的影响及其潜在分子机制。方法：利用TargetNet、SEA、STITCH数据库预测RAL的作用靶点，通过GeneCards、MalaCards、OMIM数据库筛选OSCC相关靶点，采用Venny获取交集靶点，运用Metascape对互作靶点进行GO和KEGG富集分析，借助CytoNCA、Cytohubba及MCODE插件筛选核心靶点。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞的半数抑制浓度（half-maximal inhibitory concentration,IC50）和增殖能力，通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测核心靶点的mRNA水平，通过克隆形成、划痕和Transwell小室实验检测细胞的克隆生长、迁移和侵袭能力，通过流式细胞术检测细胞凋亡及周期情况，利用转录组测序筛选差异表达基因并探究潜在分子机制，通过蛋白免疫印迹法（western blotting,WB）检测相关通路的活化水平；采用PI3K/AKT通路激活剂Recilisib进行功能回复实验，并通过裸鼠移植瘤模型评估体内药效。结果：共筛选出RAL治疗OSCC的58个潜在靶点，其中SRC、CASP3、HSP90AA1、TNF和AKT1被鉴定为核心靶点。RAL上调SRC、CASP3并下调HSP90AA1、TNF的mRNA水平（均P<0.05）;RAL以剂量依赖性方式抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力，促进细胞凋亡，阻滞细胞周期于G0/G1期（均P<0.05）；联合网络药理学和转录组数据发现PI3K/AKT信号通路为RAL抗OSCC的核心作用通路；RAL处理导致p-PI3K和p-AKT磷酸化水平下调（均P<0.05）;PI3K/AKT通路激活剂可显著逆转RAL对OSCC细胞恶性表型的抑制作用（均P<0.01），但未能逆转其对SRC等核心靶点的调控；体内动物实验证实RAL能显著抑制移植瘤的生长，抑瘤率达56%（均P<0.01）。结论：RAL可能通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活，并可能独立调控上游靶点，抑制OSCC细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力，促进细胞凋亡并阻滞细胞周期。

关键词

网络药理学 / 雷洛昔芬 / 口腔鳞状细胞癌 / PI3K/AKT信号通路 / 增殖 / 凋亡 / 迁移 / 侵袭