远华蟾毒精对肝细胞癌增殖的影响及作用机制

摘要

目的：探讨远华蟾毒精对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的治疗作用及其机制。方法：以人肝癌细胞系SKHEP-1和Huh-7为研究对象，采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测远华蟾毒精对细胞活率的影响；采用克隆形成实验检测远华蟾毒精对细胞增殖能力的影响；采用Hoechst 33258染色、流式细胞术检测远华蟾毒精对肝癌细胞凋亡的影响；采用荧光探针JC-1染色检测远华蟾毒精对肝癌细胞线粒体膜电位的影响；采用流式细胞术检测远华蟾毒精对肝癌细胞细胞周期的影响；使用转录组测序（RNA-seq）及富集分析明确远华蟾毒精对细胞整体基因表达谱的影响，并通过定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qPCR）和蛋白免疫印迹（western blotting）验证相关基因和蛋白在药物处理后的表达变化；使用KM小鼠体内荷瘤模型，评价药物的安全性和抑瘤效果。结果：远华蟾毒精能够抑制肝癌细胞活率，抑制肝癌细胞增殖能力，降低肝癌细胞线粒体膜电位，促进肝癌细胞凋亡、阻滞肝癌细胞周期（P<0.01）;RNA-seq结果显示，mTOR信号通路蛋白表达显著下调；细胞内胆固醇含量下降，下游胆固醇合成基因表达水平降低（P<0.01）。小鼠体内成瘤实验结果表明，远华蟾毒精能够抑制肿瘤体内生长（P<0.05）。结论：远华蟾毒精能够促进肝癌细胞凋亡、阻滞细胞周期，并通过调控mTOR信号通路抑制胆固醇合成，可能对HCC有治疗作用。

关键词

远华蟾毒精 / 肝细胞癌 / 细胞凋亡 / 细胞增殖 / 细胞周期 / mTOR信号通路