新型Na⁺/H⁺逆向转运蛋白UPF0118的Na⁺结合鉴定

摘要

UPF0118蛋白是一种新型Na⁺（Li⁺）/H⁺逆向转运蛋白，属于AI-2E超家族，目前已被划分至Na⁺/H⁺逆向转运蛋白亚家族，但无直接证据表明该蛋白可与Na⁺产生相互作用。为鉴定UPF0118蛋白是否具有Na⁺结合功能，利用PCR技术扩增upf0118基因编码序列，通过Eco RⅠ和PstⅠ酶切位点构建至原核表达载体p ETDuet-1，转化至E. coli BL21*（DE3），对诱导后大量表达的蛋白进行Ni2⁺亲和层析和凝胶过滤层析，利用等温滴定量热技术对纯化蛋白进行滴定。结果表明，在pH 5.5条件下，Na⁺滴入导致蛋白溶液产生明显放热现象。在pH 5.5条件下该蛋白具有Na⁺结合功能，证明该蛋白Na⁺结合功能为其功能单元与分子机制的研究奠定基础。

关键词

UPF0118 / Na⁺/H⁺逆向转运蛋白 / 等温滴定量热法 / 蛋白纯化