牛源副结核分枝杆菌MAP3732c基因的原核表达与多克隆抗体的制备

摘要

为表达副结核分枝杆菌MAP3732c蛋白，研究构建原核表达质粒pET28a-MAP3732c，诱导表达鉴定后采用His标签亲和层析纯化获得MAP3732c重组蛋白，多次免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体，采用间接ELISA方法检测其抗体效价。结果表明，成功构建克隆重组质粒T1-MAP3732c与表达重组质粒p ET28a-MAP3732c；在IPTG终浓度为0.5 mmol·L^-1、37℃条件下成功诱导MAP3732c重组蛋白表达；SDS-PAGE结果表明，MAP3732c重组蛋白大小约为28 ku，且以包涵体形式存在；Western blot鉴定结果显示，重组蛋白与His抗体和牛源副结核病阳性血清均有良好免疫反应、阴性血清无非特异性结合；ELISA方法检测结果显示，抗MAP3732c多克隆抗体效价为1:204 800。研究为副结核分枝杆菌MAP3732c蛋白免疫原性分析及副结核病检测方法建立提供理论参考。

关键词

副结核分枝杆菌 / MAP3732c / 原核表达 / 蛋白纯化 / 多克隆抗体