番茄抗叶霉病基因Cf-12的亚细胞定位和互作蛋白的筛选

张新宇; 刘晗; 谢欣欣; 孙梦琳; 蒋嘉宁; 杜南山; 薛东齐

doi:10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.01.005

东北农业大学学报 ›› 2025, Vol. 56 ›› Issue (01) : 42 -49. DOI: 10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.01.005

番茄抗叶霉病基因Cf-12的亚细胞定位和互作蛋白的筛选

张新宇, 刘晗, 谢欣欣, 孙梦琳, 蒋嘉宁, 杜南山, 薛东齐

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摘要

叶霉菌引起的叶霉病是番茄的重要病害之一，现有的Cf抗病基因易被新分化的叶霉菌小种克服。接种鉴定发现Cf-12高抗多个叶霉菌生理小种，但其抗病机制有待解析。研究首先对Cf-12基因进行亚细胞定位，利用酵母双杂交膜系统筛选Cf-12互作蛋白。结果表明：Cf-12蛋白定位在细胞膜上，虽成功构建诱饵质粒p BT3-SUC-Cf12，但该诱饵未通过蛋白功能验证，无法进行酵母膜体系筛库试验；遂构建p GBKT7-Cf12诱饵质粒进行酵母双杂交核文库筛选，诱饵质粒对Y2H Gold酵母无毒且无自激活活性。将含p GBKT7-Cf12的诱饵质粒酵母菌与番茄pGADT7-cDNA文库质粒进行共转筛库，初筛获得16个克隆，复筛获得4个阳性克隆，编码基因分别为Solyc06g062370.3、Solyc12g005850.2、Solyc06g071370.1和Solyc03g093690.3。