应用CRISPR/Cas9技术对五指山猪GHRHR基因的编辑

王文涛; 张思佳; 何鑫淼; 陈诗怡; 吴赛辉; 张冬杰; 陈瑶生; 丛佩清; 亓美玉; 田明; 刘娣; 何祖勇

doi:10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.02.005

东北农业大学学报 ›› 2025, Vol. 56 ›› Issue (02) : 44 -52. DOI: 10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.02.005

应用CRISPR/Cas9技术对五指山猪GHRHR基因的编辑

王文涛, 张思佳, 何鑫淼, 陈诗怡, 吴赛辉, 张冬杰, 陈瑶生, 丛佩清, 亓美玉, 田明, 刘娣, 何祖勇

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摘要

生长激素释放激素受体（GHRHR）表达于垂体细胞表面，调节垂体生长激素合成与分泌，对动物生长发育发挥重要调控作用。为深入了解GHRHR对五指山猪生长发育的影响，通过CRISPR-ctRNP体外酶切试验，筛选出切割效率达27.3%的1条gRNA用于构建CRISPR/Cas9表达载体。转染五指山猪肾细胞后，经流式分选富集到编辑效率高达100%的细胞群体作为供体细胞，进行体细胞核移植；再将250枚克隆胚胎转移至5头代孕母猪输卵管中，最终1头代孕母猪成功妊娠，分娩3头克隆仔猪均为GHRHR双等位基因编辑个体；编辑均导致GHRHR基因产生移码突变，可导致蛋白翻译提前终止，丧失生物学功能。最终仅有1头GHRHR编辑五指山猪存活，该个体60日龄时，体质量较野生型个体平均体质量下降23.4%。研究结果在五指山猪中实现GHRHR基因高效编辑，为培养微型宠物猪及解析GHRHR的调控功能提供理论依据。