基因表达盒多拷贝对木聚糖酶在黑曲霉中表达的影响

张会; 马佳欣; 李柱; 邵志伟; 樊俊博; 李杰

doi:10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.02.007

东北农业大学学报 ›› 2025, Vol. 56 ›› Issue (02) : 63 -71. DOI: 10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.02.007

基因表达盒多拷贝对木聚糖酶在黑曲霉中表达的影响

张会, 马佳欣, 李柱, 邵志伟, 樊俊博, 李杰

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摘要

为提高木聚糖酶在黑曲霉中的分泌表达，采用同源重组定点整合技术将含有1或2个AnxynB基因表达盒的重组表达载体质粒pSZHG6R-AnxynB1R和pSZHG6R-AnxynB2R转入Aspergillus niger TH-2上高表达的glaA基因位点，获得纯合同源重组转化子X1R和X2R；重组菌株摇瓶发酵上清液，经SDS-PAGE、酶活性和实时荧光定量PCR检测。结果表明：通过多拷贝策略，木聚糖酶酶活性提高61.27%,AnxynB基因转录水平提高102.56%，同时增加基因剂量，触发UPR响应以缓解内质网应激。重组木聚糖酶最适反应温度为50℃，最适反应pH为5.5，在此条件下酶活性最高为7 596.43 U·mL^-1。