牛MB、MH、PM三重PCR检测方法的建立与应用

沈思思; 江波涛; 刘雪松; 冯万宇; 兰世捷; 张蕾; 苗艳; 李丹; 张国华; 王欢; 王岩; 陈亮

doi:10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.02.008

东北农业大学学报 ›› 2025, Vol. 56 ›› Issue (02) : 72 -79. DOI: 10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.02.008

牛MB、MH、PM三重PCR检测方法的建立与应用

沈思思, 江波涛, 刘雪松, 冯万宇, 兰世捷, 张蕾, 苗艳, 李丹, 张国华, 王欢, 王岩, 陈亮

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摘要

为建立可同时检测牛支原体（Mycoplasma bovis,MB）、溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica,MH）和多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,PM）的三重PCR检测方法，试验采用上述3种病原体对应的copD/F（MB）、lktc（MH）、kmt（PM）基因设计特异性引物。通过筛选退火温度和引物质量浓度，验证方法特异性、敏感性和重复性，建立可同时检测MB、MH和PM的三重PCR检测方法，并初步应用于临床。结果表明：该方法特异性强，仅对MB、MH和PM有特异性扩增，方法最适退火温度为52.5℃，最适引物质量浓度为1.0 mg·L^-1；对3种病原体最低检出限MB为1.75×10～3拷贝数·μL^-1、MH为1.34×10～4拷贝数·μL^-1、PM为1.96×10～4拷贝数·μL^-1，利用该三重PCR和单项PCR分别检测黑龙江省268份临床样本，显示三重PCR阳性检出率MB为28.73%（77/268）、MH为13.43%（36/268）、PM为20.52%（55/268）。混合感染以MB和PM为主，感染率为8.96%（24/268）；其次为MB和MH，感染率为6.72%（18/268）;MH和PM感染率为3.36%（9/268）；同时感染3种病原体的感染率为1.12%（3/268）。三重PCR扩增结果与单项PCR检测结果总符合率为92.84%。说明建立的三重PCR可为MB、MH和PM临床快速检测及流行病学调查提供技术支持。